1、齊墩果酸（Oleanolic acid，OA）是一種天然的五環(huán)三萜類化合物，普遍存在于食物及120余種天然植物的子葉和根莖中。目前報(bào)道齊墩果酸的藥理作用包括保肝解毒、降血糖血脂、抗炎抗病毒、抗腫瘤及抗氧化等。而近年來，齊墩果酸在抗氧化方面的活性引起了人們廣泛的關(guān)注。但是，目前尚沒有文獻(xiàn)報(bào)道過齊墩果酸在體內(nèi)的抗衰老活性及可能潛在的作用機(jī)制。
　　目的：以秀麗隱桿線蟲（Caenorkabditiselegans，C.elegans）為

2、研究對(duì)象，評(píng)價(jià)齊墩果酸的延壽作用效果并探討其延壽的分子機(jī)制。
　　方法：1.壽命分析實(shí)驗(yàn)：將同步化的L4期線蟲分為空白對(duì)照組（0μM）和OA給藥組（100μM、200μM、300μM、600μM）進(jìn)行壽命實(shí)驗(yàn)，初步判斷OA的延壽效果并篩選出最佳給藥濃度。2.壓力應(yīng)激實(shí)驗(yàn)：通過氧應(yīng)激實(shí)驗(yàn)和36℃熱應(yīng)激實(shí)驗(yàn)，確定OA延長(zhǎng)線蟲壽命的作用與壓力應(yīng)激反應(yīng)是否存在關(guān)聯(lián)。3.線蟲體內(nèi)活性氧簇（reactive oxygen species，RO

3、S）檢測(cè)：通過探討OA對(duì)線蟲體內(nèi)ROS的清除能力以進(jìn)一步確定OA的延壽效果。4.咽泵實(shí)驗(yàn)：比較3、6、10天的空白對(duì)照組與OA給藥組線蟲在15s內(nèi)的咽泵次數(shù)以及限食相關(guān)突變株壽命實(shí)驗(yàn)，綜合判斷OA的延壽效果是否與熱限制機(jī)制有關(guān)。5.daf-16(mgDf50)突變株壽命實(shí)驗(yàn)：探討OA對(duì)缺失daf-16基因的線蟲壽命是否存在影響。6. DAF-16亞細(xì)胞定位實(shí)驗(yàn)：給藥后觀察DAF-16::GFP轉(zhuǎn)基因線蟲中DAF-16的亞細(xì)胞定位情況。7

4、. Quantitative real-time PCR實(shí)驗(yàn)：OA給藥后提取線蟲內(nèi)總RNA，利用熒光定量PCR檢測(cè)daf-16及下游相關(guān)基因sod-3、ctl-1、hsp-16.2的表達(dá)量變化。
　　結(jié)果：1.通過壽命分析實(shí)驗(yàn)可知OA在一定的濃度范圍內(nèi)可延長(zhǎng)線蟲壽命，且300μM OA為最佳給藥濃度。2. OA能顯著提高線蟲在氧應(yīng)激、熱應(yīng)激環(huán)境下的生存率，證實(shí)OA延壽作用與壓力應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)。3. OA能夠降低線蟲內(nèi)ROS的水平，進(jìn)

5、一步說明OA具有延壽效果。4. OA不影響線蟲的咽泵頻率及限食突變株的壽命長(zhǎng)短，從而確認(rèn)OA的延壽作用不是通過熱量限制途徑實(shí)現(xiàn)的。5.分子機(jī)制研究表明，OA促進(jìn)DAF-16進(jìn)入細(xì)胞核以提高DAF-16的轉(zhuǎn)錄活性，進(jìn)一步啟動(dòng)與衰老相關(guān)的下游基因的表達(dá)，從而延長(zhǎng)線蟲的壽命。
　　結(jié)論：綜上所述，我們以線蟲為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，評(píng)價(jià)了OA的延壽作用并對(duì)其潛在的分子機(jī)制進(jìn)行了初步探索。daf-16是一個(gè)從線蟲到哺乳動(dòng)物都高度保守的壽命調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子，