1、目的:通過體外實驗,進一步明確B7-H4分子在小鼠間充質干細胞C3H10T1/2(以下簡稱C3H10)增殖、生存及遷移等生物學行為中的作用;通過體內實驗,探討B(tài)7-H4分子在C3H10細胞移植治療小鼠EAE模型的體內效應。
　　方法:1、構建B7-H4靶向shRNA轉染的C3H10細胞(C3H10-shRNA),應用免疫熒光標記、流式細胞術檢測B7-H4表達下調后,C3H10細胞的增殖能力、凋亡情況;檢測C3H10細胞表面趨化因子

2、受體CXCR4的表達,間接觀察C3H10細胞遷移能力的改變;將C3H10、C3H10-shRNA等與小鼠脾臟淋巴細胞共同培養(yǎng),用FCM檢測其對淋巴細胞增殖作用。
　　2、利用MOG35-55肽與完全弗氏佐劑混合,制作乳化劑進行腋下皮下單點注射,百日咳桿菌疫苗毒素尾靜脈注射建立小鼠EAE(實驗性自身免疫性腦脊髓炎)模型,分以下幾組進行移植研究:(1)尾靜脈注射PBS的假手術組;(2)輸注PBS的造模EAE小鼠;(3)C3H10細胞移

3、植組;(4)C3H10-NC細胞(轉染了未含靶向分子對照shRNA的C3H10)移植組;(5)C3H10-shRNA細胞(轉染了B7-H4靶向shRNA的C3H10)移植組。其中C3H10細胞移植組、C3H10-NC細胞移植組、C3H10-shRNA細胞移植組在免疫后第6天分別經尾靜脈在EAE模型小鼠體內輸注1×106/只各組細胞,每日對各組小鼠進行神經功能缺損評分、體重測量,組織病理檢測炎性細胞浸潤、髓鞘脫失、軸突損害以及組織化學染色

4、檢測B7-H4表達,評定不同干預手段對EAE病理過程的影響,明確B7-H4分子在C3H10移植治療EAE中的作用。
　　結果:1、下調C3H10上B7-H4,可部分逆轉C3H10對脾臟淋巴細胞增殖的抑制作用;并使C3H10細胞本身增殖減慢、凋亡增多;細胞表面趨化因子受體CXCR4表達下調。
　　2、體內實驗結果顯示:(1)神經功能缺損評分:尾靜脈輸注PBS的假手術組(正常對照組)小鼠無發(fā)病,輸注PBS的EAE造模組小鼠發(fā)病時

5、間早且癥狀重,神經功能缺損評分高;經C3H10細胞及C3H10-NC細胞移植組小鼠發(fā)病時間晚且癥狀嚴重程度較輕,神經功能缺損評分維持在較低水平;C3H10-shRNA細胞移植組小鼠發(fā)病程度較C3H10細胞移植組重,但較EAE造模組小鼠嚴重程度較低。本次實驗小鼠發(fā)病率達90％,死亡1只,死亡率2.5％。(2)體重測量:正常對照組小鼠體重呈持續(xù)增長趨勢;EAE造模組小鼠體重在發(fā)病后一段時間呈下降趨勢,后有緩慢增長,而C3H10-shRNA細

6、胞移植組小鼠體重變化基本與EAE造模組一致;C3H10細胞及C3H10-NC細胞移植治療組體重在觀察期間有波動,整體呈上升趨勢,但體重增加幅度與正常對照組相比較緩。(3)脊髓病理檢測顯示,假手術組小鼠未見明顯異常,EAE造模組、C3H10細胞移植組、C3H10-NC細胞移植組、C3H10-shRNA細胞移植組均出現炎性細胞浸潤、髓鞘脫失及軸索損害表現,但C3H10移植組小鼠炎性細胞浸潤、髓鞘脫失及軸索損害程度明顯較C3H10-shRNA