改良的間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)方法.pdf_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、第一部分:改良的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)方法
  目的:建立人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(hUCMSCs)的分離和培養(yǎng)方法。
  方法:用酶消化法、傳統(tǒng)組織塊法和改良組織塊法從人臍帶華通膠中分離間充質(zhì)干細(xì)胞,對(duì)比三種方法所培養(yǎng)的原代細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)及數(shù)量;流式細(xì)胞儀檢測(cè)改良組織塊法所培養(yǎng)細(xì)胞的免疫表型;用不同的培養(yǎng)體系誘導(dǎo)改良法所培養(yǎng)細(xì)胞向成骨細(xì)胞及成脂細(xì)胞分化,并對(duì)其進(jìn)行鑒定。
  結(jié)果:改良的hUCMSCs的培養(yǎng)方法所培養(yǎng)的細(xì)胞

2、純度更高,改良組織塊法所獲得的原代細(xì)胞數(shù)量是酶消化法的2倍左右,是傳統(tǒng)組織塊法的約20倍,細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形生長(zhǎng);高表達(dá)CD90、CD44,不表達(dá)CD45、CD34;茜素紅染色及油紅O染色證實(shí)了hUCMSCs可分化為脂肪細(xì)胞和成骨細(xì)胞。
  結(jié)論:建立了hUCMSCs的培養(yǎng)新方法,證實(shí)了hUCMSCs的增殖能力和多向分化潛能,為其在疾病治療方面的應(yīng)用提供支持。
  第二部分:改良的BALB/C小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)方法

3、  目的:建立BALB/C小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)的培養(yǎng)方法。
  方法:用全骨髓培養(yǎng)法和改良的全骨髓培養(yǎng)法從BALB/C小鼠脛骨和股骨中分離間充質(zhì)干細(xì)胞,對(duì)比兩種方法所培養(yǎng)原代細(xì)胞的生長(zhǎng)情況及數(shù)量;流式細(xì)胞儀檢測(cè)改良法所培養(yǎng)細(xì)胞的免疫表型;用成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)體系誘導(dǎo)改良法所培養(yǎng)的BMSCs向成骨細(xì)胞分化,并對(duì)其進(jìn)行鑒定。
  結(jié)果:改良的全骨髓培養(yǎng)法所培養(yǎng)的原代細(xì)胞數(shù)量上較傳統(tǒng)方法增加了約50%,細(xì)胞生長(zhǎng)更快;流式細(xì)

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