1、目的:
　　1、觀察不同濃度H2O2短時(shí)間處理對(duì)昆明(KM)小鼠1-細(xì)胞胚體外發(fā)育的影響。
　　2、觀察表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)是否能逆轉(zhuǎn)H2O2預(yù)處理導(dǎo)致的小鼠早胚體外發(fā)育阻滯。
　　3、檢測(cè)EGCG培養(yǎng)后小鼠2-細(xì)胞胚中總ERα和磷酸化ERα(Ser167)分布和表達(dá)水平的變化,探討EGCG促進(jìn)小鼠早胚體外發(fā)育的機(jī)制。
　　方法:
　　1、取KM小鼠1-細(xì)胞胚,置于不同終濃度H2O2的M16

2、培養(yǎng)液中培養(yǎng)25min后,分別移入M16或M16+EGCG培養(yǎng)液中培養(yǎng),觀察各組發(fā)育情況。
　　2、取KM小鼠1-細(xì)胞胚,分別置于M16和M16+EGCG培養(yǎng)液中,體外培養(yǎng)至2-細(xì)胞胚期(hCG后50h),用激光掃描共聚焦顯微鏡檢測(cè)胚內(nèi)ERα與磷酸化ERα(Ser167)的表達(dá)和定位情況。
　　結(jié)果:
　　1、較低濃度(1μM、10μM)H2O2處理1-細(xì)胞胚25min可以促進(jìn)KM小鼠早胚體外發(fā)育;較高濃度(20μM、

3、40μM)H2O2抑制早胚體外發(fā)育。
　　2、用10μg/mLEGCG可以逆轉(zhuǎn)由20μMH2O2預(yù)處理導(dǎo)致的早胚發(fā)育阻滯,使4-細(xì)胞和桑葚胚發(fā)育率恢復(fù)空白對(duì)照水平,但無(wú)法提高囊胚發(fā)育率。
　　3、激光掃描共聚焦顯微鏡觀察顯示,10μg/mLEGCG培養(yǎng)KM小鼠2-細(xì)胞胚的胞質(zhì)中磷酸化ERα(Ser167)水平升高。
　　結(jié)論:
　　在小鼠早胚1-細(xì)胞和2-細(xì)胞階段維持適宜濃度的氧自由基可能具有重要意義。高濃度的氧

4、自由基可對(duì)早胚發(fā)育產(chǎn)生不可逆的傷害,較低濃度的氧自由基可以提高早胚發(fā)育率。適宜濃度的EGCG可逆轉(zhuǎn)高濃度H2O2引起的早胚發(fā)育阻滯,但無(wú)法提高囊胚發(fā)育率。所以推測(cè)EGCG可能是通過(guò)清除氧自由基維持正常的卵裂,但是不能恢復(fù)由H2O2預(yù)處理引起的囊胚形成障礙。EGCG作用導(dǎo)致小鼠2-細(xì)胞胚磷酸化ERα(Ser167)水平升高,但是總ERα含量及定位不變,提示EGCG促進(jìn)小鼠早胚體外發(fā)育的機(jī)制可能是通過(guò)對(duì)ERα轉(zhuǎn)錄后修飾途徑,而不引起ERα蛋