1、目的：食管癌是最常見的消化道惡性腫瘤之一，其5年生存率與腫瘤的浸潤和轉移密切相關，其中淋巴道轉移是食管癌最常見的轉移途徑。研究表明，許多惡性腫瘤在發(fā)生淋巴結轉移時，均有新生淋巴管形成，這些新生淋巴管與惡性腫瘤早期淋巴結轉移及其不良預后密切相關。因此，探討食管癌淋巴道轉移的可能機制，了解腫瘤轉移的生物學行為至關重要。 D2-40是新發(fā)現(xiàn)的特異性淋巴管標志物，能特異地與淋巴管內皮反應，而不與血管內皮反應。因此，D2-40被廣泛地用于

2、標記實體腫瘤組織中的淋巴管內皮。血管內皮生長因子-C(VEGF-C)為血管內皮生長因子(VEGF)家族的一個成員，是近年來新發(fā)現(xiàn)的促淋巴管生長因子，可與其受體VEGFR-3結合，誘導實體瘤內或腫瘤周圍的淋巴管生成和/或擴張，促進腫瘤的淋巴結轉移。 為了進一步探討食管癌的轉移機制，本研究采用免疫組織化學染色法，檢測食管癌組織中D2-40和VEGF-C的表達情況，評估。D2-40和VEGF-C在食管癌浸潤和轉移中的意義。 方

3、法: 1、病例選擇：所有資料均為邢臺市腫瘤醫(yī)院和邢臺市礦務局總醫(yī)院2004年11月～2006年10月手術切除、經病理確診的食管鱗狀細胞癌標本存檔蠟塊60例，術前均未行化療和放療。根據(jù)2000年新的食管腫瘤組織學分級標準分類，高分化鱗癌20例，中分化鱗癌14例，低分化鱗癌26例。有淋巴結轉移者28例，無淋巴結轉移者32例。浸潤深度分兩組，腫瘤浸潤達粘膜層、粘膜下層或淺肌層者為淺層組，共9例，腫瘤浸潤達深肌層或外膜者為深層組，共51

4、例。另選10例病理未發(fā)現(xiàn)異常的食管組織作為正常對照。 2、免疫組織化學染色及結果判斷：采用免疫組化S-P法，分別檢測10例正常食管組織和60例食管鱗狀細胞癌石蠟包埋組織中D2-40、VEGF-C表達情況及淋巴管的分布特點。 2．1 D2-40陽性結果判斷：D2-40陽性免疫產物定位于細胞質，呈棕黃色顆粒。凡染成棕黃色細顆粒狀，管壁由單層內皮樣細胞構成，均確認為陽性淋巴管。分別對食管鱗狀細胞癌組織腫瘤邊緣區(qū)(正常組織與腫

5、瘤交界區(qū))、中心區(qū)(實體腫瘤內部)<'[3]>以及正常食管組織進行計數(shù)。先在低倍鏡下(100×)觀察整張切片的淋巴管分布情況后，然后于高倍視野(400×)下每例計數(shù)3個視野的淋巴管數(shù)，取均值作為該病例的淋巴管密度(LVD)<'[4]>，以x±S/高倍視野值(x±S/HPF)表示。 2．2 VEGF-C陽性結果判斷：VEGF-C陽性免疫產物定為于細胞質，呈棕黃色顆粒。參照Kinoshita<'[5]>等的判定標準，以組織中陽性細胞

6、的比值進行判斷，陽性細胞數(shù)<10％為(-)，≥10％為(+)。 3、統(tǒng)計學處理：在Excel中進行數(shù)據(jù)整理，應用SPSS10.0統(tǒng)計分析軟件包，采用X<'2>檢驗、t檢驗和方差分析，LND以x±S表示。 結果: 1、D2-40在正常組織及食管鱗狀細胞癌中的表達結果 1．1 D2-40在正常組織及食管鱗狀細胞癌中的表達情況D2-40陽性免疫產物為棕黃色顆粒，位于內皮細胞胞質。正常食管組織D2-40陽性表達的

7、淋巴管主要位于粘膜下，分布稀疏；食管鱗狀細胞癌組織中D2-40陽性淋巴管主要位于腫瘤邊緣區(qū)，淋巴管密集。 1．2正常食管組織和食管鱗狀細胞癌中的LVD 光鏡下計數(shù)淋巴管的密度，正常食管組織LVD為3.08±1.86/HPF，而食管鱗狀細胞癌為6.67±3.89/HPF，食管鱗狀細胞癌組織中淋巴管密度明顯高于正常食管組織(P<0.01)，提示食管鱗狀細胞癌組織中內具有更豐富的淋巴管。 1.3食管鱗狀細胞癌不同區(qū)域L

8、VD的差異 免疫組化結果顯示，食管鱗狀細胞癌腫瘤組織不同區(qū)域D2-40陽性表達的淋巴管密度和形態(tài)特點有一定差異，腫瘤邊緣區(qū)淋巴管密度明顯高于腫瘤中心區(qū)(P<0.01)，在形態(tài)上腫瘤邊緣區(qū)淋巴管多數(shù)呈擴張狀態(tài)，而中心區(qū)的淋巴管很少擴張。 1．4 LVD與食管癌淋巴結轉移的關系 淋巴結轉移組和無淋巴結轉移組LVD分別為9.09±2.52/HPF和7.07±2.20/HPF，淋巴結轉移組LVD顯著高于無淋巴結轉移組(P

9、<0.01)。 1．5 LVD與食管鱗狀細胞癌其他臨床病理特征的關系食管鱗狀細胞癌中D2-40表達與患者的年齡、腫瘤大小、分化程度以及浸潤深度無關。 2、VEGF-C在正常組織及食管鱗狀細胞癌中的表達情況 10例正常食管組織未見VEGF-C陽性表達。食管鱗狀細胞癌組織中，癌細胞和間質細胞均有VEGF-C陽性表達，但以癌細胞為主。60例食管鱗狀細胞癌VEGF-C陽性表達率為55.00％，伴淋巴結轉移組病例中VEGF

10、-C陽性表達率明顯高于無淋巴結轉移組(71.43％vs 40.63％，P<0.05)。在高分化、中分化、低分化組VEGF-C陽性表達率分別為30.00％、57.14％和73.08％，隨著腫瘤分化程度降低VEGF-C陽性表達率逐步增高(P<0.05)。深層浸潤組VEGF-C陽性表達率為62.75％，明顯高于淺層浸潤組的11.11％(P<0.05)。VEGF-C表達與患者的年齡以及腫瘤大小無關。 3 食管鱗狀細胞癌組織中VEGF-

11、C表達與LVD的相關性 33例VEGF-C陽性表達的食管鱗狀細胞癌組織中，其LVD為8.26±4.24/HPF，而VEGF-C陰性表達的病例LVD為4.17±4.11/HPF，明顯低于VEGF-C陽性組(P<0.01)，提示食管鱗狀細胞癌組織中VEGF-C陽性表達與LVD相關。 結論: 1、正常食管組織和食管鱗狀細胞癌組織中均可見D2-40陽性表達的淋巴管，但食管鱗狀細胞癌組織中淋巴管密度明顯高于正常食管組織。說

12、明食管鱗狀細胞癌組織中具有更豐富的淋巴管。 2、食管鱗狀細胞癌邊緣區(qū)淋巴管密度>中心區(qū)，且邊緣區(qū)淋巴管多數(shù)呈擴張狀態(tài)，而中心區(qū)的淋巴管很少擴張；食管鱗狀細胞癌伴淋巴結轉移組LVD明顯高于無淋巴結轉移組。提示食管鱗狀細胞癌邊緣區(qū)淋巴管的密度和形態(tài)與淋巴結轉移密切相關。D2-40的陽性表達對于判斷食管鱗癌的預后有重要的參考價值。 3、VEGF-C在正常組織中無表達，食管鱗狀細胞癌組織呈高表達：食管鱗癌中VEGF-C的表達與L