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![嗜鹽α-淀粉酶的鑒定及其與嗜鹽相關的氨基酸殘基研究.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-2/24/12/7c30af66-4293-4da9-94d4-b72c28b3e5ca/7c30af66-4293-4da9-94d4-b72c28b3e5ca1.gif)
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文檔簡介
1、嗜鹽α-淀粉酶具有獨特的鹽適應機制,使其在各種高鹽等極端環(huán)境中,依然能夠高效、穩(wěn)定地行使其生物催化能力,在精密化工、水產、食品及其診斷試劑等眾多行業(yè)中,都具有廣闊的應用前景。目前,雖然嗜鹽酶的相關研究已經成為一個熱點,但是目前嗜鹽酶的鹽適應性機理還處于假說階段,還不能完全解釋嗜鹽酶的嗜鹽分子機理,因此繼續(xù)嗜鹽酶的相關研究,對探索其嗜鹽的本質就顯得尤為重要。
從非嗜鹽的大腸桿菌JM109中克隆到一個嗜鹽α-淀粉酶基因并重組表達。
2、通過蛋白比對、同源建模,確定Na+結合位點上的氨基酸殘基,并對相應位點進行定點突變,以此來初步探索嗜鹽淀粉酶的嗜鹽特性和機理。突變酶的酶學性質研究結果表明,相對于野生酶而言,突變酶K6-N204D和K6-P368G更加嗜鹽,其最適NaCl濃度由野生酶的2 mol/L增加到3 mol/L,具有更好的嗜鹽性,最適pH均為7.0,最適溫度分別為55℃、50℃,比活力分別為18200 U/mg和4831U/mg。此外突變酶K6-N204D和K6
3、-P368G在無NaCl情況下,也顯示出了酶活,雖然其比活偏低僅為30 U/mg和130 U/mg,但是相對于野生酶K6而言,已是很大的改變。而K6-R208D-N209H-A211E三點連續(xù)突變后,其蛋白酶在有無NaCl情況下,均不顯示出酶活。
與此同時,本文還從同樣屬于非嗜鹽菌的根癌農桿菌EHA1252中獲得一個嗜鹽α-淀粉酶基因,經表達純化,研究其相關的酶學性質,測定結果顯示,其最適NaCl濃度達到近飽和的5.5 mol
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