1、梅毒是嚴重危害人類健康的傳染病之一，其病原體為梅毒螺旋體(Treponema pallidum，Tp)。血清梅毒抗體水平是診斷梅毒螺旋體感染的主要指標，傳統(tǒng)方法包括性病實驗室研究試驗、熒光螺旋體吸收試驗和梅毒螺旋體血球凝集試驗等。近年來，以酶標板為載體的梅毒螺旋體IgM和IgG抗體的檢測已被用于臨床檢驗和血站血液篩查。本研究工作包括兩個部分：1．梅毒螺旋體抗原TpN17在畢赤酵母中的表達與純化。2．以金磁微粒為載體，利用純化得到的TpN

2、17抗原和市售梅毒螺旋體混合抗原(TpN15，TpN17，TpN47)建立針對梅毒螺旋體抗體的雙抗原夾心檢測方法。 通過甲醇誘導，畢赤酵母表達系統(tǒng)中表達重組梅毒螺旋體抗原TpN17，樣品經(jīng)飽和硫酸銨沉淀粗提后，以陽離子層析交換柱對表達的TpNl7進行進一步純化。結果表明，樣品經(jīng)硫酸銨沉淀、PB復溶后以陽離子交換層析柱進行純化，NaCl濃度梯度洗脫，可獲得純度大于90％的重組梅毒螺旋體抗原TpN17。Bradford法測定蛋白濃度

3、為0.66 mg/mL。用過碘酸鈉法將辣根過氧化物酶(HRP)標記到抗原TpN17上，雙抗原夾心法測定HRP-TpNl7滴度為1：3,200，作為包被的TpN17和標記抗原HR：P-TpN17可用于梅毒螺旋體抗體的檢測。 金磁微粒(Fe<,3>O<,4>/Au)是結合磁性氧化物粒子和膠體金特點的新型磁性復合微粒，組裝結構的金磁微粒具有磁性Fe<,3>O<,4>核，表面組裝有大量納米級金粒子，集膠體金對生物分子的快速固定化和磁性納

4、米粒子在外磁場可分離性于一體，在免疫學檢測領域具有重要的應用價值。利用雙抗原夾心法原理，以純化得到的TpN17和標記抗原HRP-TpN17，初步建立了基于金磁微粒的梅毒螺旋體抗體的檢測方法。金磁微粒表面形成夾心復合物后以3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺底物顯色，磁性分離后測定上清液在450 nm處吸光度值。結果表明，在固定抗原量為480 ng/管、HRP-標記抗原稀釋度為1：1，600時，陽性血清的檢測值可達1．7以上，對已確診患者血清

5、樣本的檢測表明，該方法的陽性檢出率為93.3％，還存在6.7％的漏檢率，說明方法的靈敏度和特異性還有待改進。為完善以金磁微粒為載體檢測梅毒抗體的方法，采用市售的重組梅毒螺旋體混合抗原(TpN47，Tpy17，TpN15)對梅毒螺旋體抗體進行檢測。將固定有混合抗原的金磁微粒與血清(或血漿)及HRP-標記混合抗原在37℃溫育30 min后以3，3’，5，5’-四甲基聯(lián)苯胺底物顯色，磁性分離后測定上清液在450 nm處吸光度值。對方法的臨界值