1、目的：建立小鼠視網膜光損傷模型，探討白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor，LIF)對小鼠視網膜光感受器視錐細胞光損傷的影響。
　　 方法：采用5000lux白色冷光源對BALB/c小鼠進行6h(下午6:00到凌晨12:00)持續(xù)照射，建立小鼠視網膜光損傷模型。30只小鼠分為五組:①正常對照組10只、玻璃體腔注藥組10只（②右眼為玻璃體腔LIF注藥組;③左眼為玻璃體腔PBS注藥組）和光損傷+玻璃體腔

2、注藥組10只（④右眼為光損傷+玻璃體腔LIF注藥組;⑤左眼為光損傷+玻璃體腔PBS注藥組）。光照前2d給予玻璃體腔注藥，右眼玻璃體腔LIF（0.4μg/μl，1μl）注藥，左眼玻璃體腔PBS(0.01M，1μl)平衡緩沖液注射（作為自身對照）。(1)光照后7天，視網膜電流圖(electroretinogram，ERG)檢查分別采用白光、綠光及藍光三種不同光刺激對視網膜光感受器視錐細胞的功能進行檢測;(2) ERG檢查后，運用免疫熒光組織

3、化學通過M視錐細胞和S視錐細胞特異性標志蛋白M-opsin和S-opsin對視網膜光感受器視錐細胞的數量和形態(tài)進行檢測。
　　 結果：(1)在白光、綠光及藍光刺激下，與正常對照組ERG b波振幅相比，玻璃體腔LIF注藥組和玻璃體腔PBS注藥組均無明顯變化，其差異無統(tǒng)計學意義(p＞0.05);光損傷+玻璃體腔LIF注藥組和光損傷+玻璃體腔PBS注藥組均明顯下降，其差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。同時，與光損傷+玻璃體腔LIF注藥

4、組ERG b波振幅相比，光損傷+玻璃體腔PBS注射組明顯下降，其差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。(2)與正常對照組M-opsin和S-opsin的數量和形態(tài)相比，玻璃體腔LIF注藥組和玻璃體腔PBS注藥組均無明顯變化;光損傷+玻璃體腔LIF注藥組和光損傷+玻璃體腔PBS注藥組M-opsin和S-opsin的數量均明顯下降，并且光損傷+玻璃體腔PBS注藥組M-opsin和S-opsin的形態(tài)均明顯受損。
　　 結論：5000lu

5、x白色冷光源對BALB/c小鼠進行6h持續(xù)照射可對視網膜光感受器視錐細胞的功能和形態(tài)產生嚴重損傷。玻璃體腔注射LIF對視網膜光感受器視錐細胞光損傷具有保護作用。
　　 第二章氧化損傷條件下STAT3、ERK1/2和AKT信號通路激活促進661W細胞存活
　　 目的：研究過氧化氫(hydrogen peroxide，H2O2)對鼠視網膜光感受器視錐細胞661W細胞株細胞活性的影響，并探討在氧化損傷條件下信號傳導子與轉錄激活

6、因子3（signal transducer and activator oftranscription3，STAT3）信號通道、細胞外信號調節(jié)激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase1 and2，ERK1/2)信號通道和蛋白激酶B(protein kinase B，PKB(AKT)）信號通道對661W細胞株細胞活性的影響。
　　 方法：體外培養(yǎng)鼠視網膜光感受器視錐細胞661W細胞株。

7、(1)不同濃度H2O2（0，0.25，0.50，0.75，1mM）干預12h，采用MTT方法檢測661W細胞株細胞活性;(2)運用不同濃度H2O2(0，0.005，0.01，0.05，0.5，1mM)干預661W細胞15min與1mM H2O2干預不同時間點(0，5，10，15，30min)，采用Westem blot方法檢測p-Tyr705-STAT3、 STAT3、p-ERK1/2、 ERK1/2、p-ser473-AKT和AKT蛋

8、白質的表達;(3)運用50μM STAT3特異性抑制劑S3I201、50μM MEK1（ERK1/2直接上游）特異性抑制劑PD98059和20μMAKT抑制劑分別干預661W細胞1h，采用Western blot方法檢測細胞信號通路抑制劑對STAT3、ERK1/2和AKT信號通路的抑制作用。50μM S3I201、50μM PD98059或者20μM AKT抑制劑預處理1h后1 mM H2O2干預12h，采用MTT方法檢測信號通路抑制劑

9、對661W細胞株細胞活性的影響。
　　 結果：(1)不同濃度H2O2作用12h后，661W細胞株的細胞活性呈濃度依賴性下降，其差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05);(2) H2O2誘導661W細胞STAT3、ERK1/2和AKT磷酸化，其差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05);(3) S3I201、PD98059和AKT信號通道抑制劑預處理后，H2O2誘導的661W細胞STAT3、ERK1/2或AKT磷酸化分別受抑制，其差異有統(tǒng)計學意義(

10、p＜0.05)。用S3I201、PD98059和AKT信號通道抑制劑分別抑制STAT3、ERK1/2或AKT信號通路后，661W細胞株細胞活性均明顯下降，其差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。
　　 結論：H2O2可激活661W細胞STAT3、ERK1/2和AKT信號通路。氧化損傷條件下，STAT3、ERK1/2和AKT信號通路的激活是661W細胞存活所必需的。
　　 第三章氧化損傷條件下LIF通過激活STAT3信號通路促

11、進661W細胞存活
　　 目的：研究氧化損傷條件下，LIF對661W細胞活性的影響及其作用機制。
　　 方法：體外培養(yǎng)鼠視網膜光感受器視錐細胞661W細胞株。(1)5ng/ml LIF預處理661W細胞1h后1mM H2O2干預12h，采用MTT方法檢測661W細胞株細胞活性;(2)5ng/ml LIF預處理661W細胞1h后1mM H2O2干預15min，采用Western blot方法檢測661W細胞p-Tyr705

12、-STAT、 STAT3、p-ERK1/2、 ERK1/2、p-Ser473-AKT和AKT蛋白質的表達。5ng/ml LIF干預661W細胞1h，采用免疫熒光組織化學方法檢測661W細胞p-Tyr705-STAT、p-ERK1/2和p-Ser473-AKT蛋白質的表達和定位;(3)50μM STAT3特異性抑制劑S3I201預處理661W細胞1h后5ng/ml LIF預處理1h，然后1mMH2O2干預12h，采用MTT方法檢測661W

13、細胞株細胞活性;(4)50μMS3I201預處理661W細胞1h后1mM H2O2干預15min，采用Westernblot方法檢測細胞周期蛋白D1(cyclin D1)和細胞周期蛋白E(cyclinE)蛋白質的表達。
　　 結果：(1)氧化損傷條件下，LIF可降低H2O2誘導的661W細胞死亡，其差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。(2)正常和氧化損傷條件下，LIF均只激活STAT3信號通道，其差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05);

14、不激活ERK1/2和AKT信號通道，其差異無統(tǒng)計學意義(p＞0.05)。(3)氧化損傷條件下，S3I201減弱LIF的保護作用，其差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。(4)氧化損傷條件下，阻斷STAT3信號通道減少STAT3靶基因cyclin D1和cyclin E蛋白的表達，其差異均有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。
　　 結論：我們的研究表明LIF作為661W細胞一個新的存活因子，氧化損傷條件下通過激活STAT3信號通道及其靶基因