1、該文用英國(guó)葛蘭素公司重組構(gòu)建表達(dá)的三種抗原蛋白SP-10,AEG,tMDC-Ⅲ免疫大鼠,通過(guò)ELISA實(shí)驗(yàn)、免疫熒光組化實(shí)驗(yàn)、交配實(shí)驗(yàn)對(duì)它們的免疫原性、在體內(nèi)的生殖作用、精子表達(dá)部位進(jìn)行了分析,結(jié)果如下：1.三種克隆表達(dá)的精子蛋白TMDC-Ⅲ、SP-10和AEG免疫動(dòng)物可成功產(chǎn)生抗體,并符合抗體產(chǎn)生的一般規(guī)律.ELISA試驗(yàn)和免疫熒光組化試驗(yàn)證明這三種重組蛋白較好地保持了天然蛋白形式的免疫原性,可用于體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究它們的具體作用.

2、2.通過(guò)免疫大鼠交配實(shí)驗(yàn)研究精子蛋白tMDC-Ⅲ、SP-10和AEG在體內(nèi)的生殖作用,發(fā)現(xiàn)對(duì)照組、tMDC-Ⅲ、SP-10和AEG免疫組大鼠受精率分別為91.6﹪,83.3﹪,75.0﹪ and 58.3﹪,AEG免疫組大鼠受精率顯著降低.首次表明tMDC-Ⅲ免疫大鼠雖然產(chǎn)生高滴度抗體,但受精率只有微弱下降.3.通過(guò)檢查免疫大鼠睪丸、附睪、卵巢、輸卵管的組織形態(tài),未見(jiàn)任何異常,說(shuō)明三種抗原免疫動(dòng)物不是通過(guò)抑制精子發(fā)育和損傷生殖道而降低受

3、精率的,同時(shí)說(shuō)明了它們對(duì)機(jī)體的安全性,可作為免疫疫苗開(kāi)發(fā)的侯選者.4.利用間接免疫熒光法對(duì)AEG、SP-10、tMDC-Ⅲ蛋白在人、小鼠、兔子、豬、牛精子上進(jìn)行了精確定位,AEG、SP-10在頂體部均有表達(dá),確證了它們與精卵融合有關(guān);首次對(duì)tMDC-Ⅲ蛋白在人、小鼠、兔子、豬、牛精子進(jìn)行了精確定位,它主要存在于人精子尾部主段,小鼠和牛精子頂體,豬精子頂體和頸部,兔精子頭部、頸部和尾部的主段及尾段.除人外,其它幾種動(dòng)物精子頂體均有tMDC