1、小麥籽粒硬度是決定小麥磨粉品質(zhì)的最主要因素，能夠影響小麥的終用途及其在國(guó)際貿(mào)易中的價(jià)格。從分子水平上說(shuō)，小麥籽粒硬度主要由位于染色體5D上兩個(gè)基因Puroindoline a和b（PinA和PinB）所決定，Pin基因的功能研究和轉(zhuǎn)基因應(yīng)用對(duì)小麥品質(zhì)改良具有重要意義。六倍體小麥（AABBDD）由于存在野生型的Pin基因，籽粒通常表現(xiàn)為“軟質(zhì)”。目前愈來(lái)愈多的研究推測(cè)PINA和PINB在決定籽粒硬度過(guò)程中，可能以協(xié)同作用的方式發(fā)揮作用，并

2、且一些最新研究顯示兩者可能存在相互作用。利用RNAi技術(shù)——這種能夠特異性地引起單個(gè)基因發(fā)生轉(zhuǎn)錄后水平的沉默的技術(shù)——分別抑制PINA和PINB蛋白的表達(dá)對(duì)研究它們的生物學(xué)功能，以及創(chuàng)制六倍體中的硬質(zhì)小麥種質(zhì)都具有重要意義。
　　 本研究在構(gòu)建能夠特異地引發(fā)PinA基因RNAi的載體方面進(jìn)行了探索。RNAi載體所需的元件——能夠反向互補(bǔ)PinA基因正向序列和反向序列以及用于連接兩者的內(nèi)含子——都通過(guò)PCR來(lái)獲得。在PCR引物設(shè)計(jì)

3、中，引入了Bam HⅠ、SpeⅠ、XbaⅠ、SacⅡ四個(gè)酶切位點(diǎn)，通過(guò)雙酶切按順序?qū)inA基因的正向序列、內(nèi)含子和反向序列連接在一起。然后再通過(guò)SmaⅠ和SacⅠ的雙酶切定向的將這個(gè)發(fā)夾結(jié)構(gòu)連接到含有Ubi-1啟動(dòng)子的小麥表達(dá)載體p AHC25中。該RNAi載體在Ubi-1啟動(dòng)子的驅(qū)動(dòng)下，廣譜表達(dá)PinA基因的雙鏈發(fā)夾結(jié)構(gòu)RNA，從而引起PinA基因的基因沉默。這為利用RNAi技術(shù)研究小麥中PinA、PinB的生物學(xué)功能和它們?cè)谟绊懽?/p>