1、密度離心法是樣品在一定惰性梯度介質中進行離心沉淀或沉降平衡，在一定離心力下把顆粒分配到梯度中某些特定位置上，形成不同區(qū)帶的分離方法。該法的優(yōu)點是：①分離效果好，可一次獲得較純顆粒；②適應范圍廣，既能分離具有沉淀系數差的顆粒，又能分離有一定浮力密度的顆粒；③顆粒不會積壓變形，能保持顆?；钚裕⒎乐挂研纬傻膮^(qū)帶由于對流而引起混合。缺點：①離心時間較長；②需要制備梯度；③操作嚴格，不宜掌握。等密度離心法1原理等密度離心法是在離心前預先配制介質

2、的密度梯度，此種密度梯度液包含了被分離樣品中所有粒子的密度，待分離的樣品鋪在梯度液或和梯度液先混合，離心開始后，當梯度液由于離心力的作用逐漸形成底濃而管頂稀的密度梯度，與此同時原來分布均勻粒子也發(fā)生重新分布。當管底介質的密度大于粒子的密度，粒子上??；在彎頂處粒子密度大于介質密度時，則粒子沉降，最后粒子進入到一個它本身的密度位置即粒子密度等于介質密變，此時dr／dt為零粒子不再移動，粒子形成純組分的區(qū)帶，與樣品粒子的密度有關，而與粒子的大

3、小和其他參數無關，因此只要轉速、溫度不變，則延長離心時間也不能改變這些粒子的成帶位置。2注意點：①離心時間要長②可用角式轉頭或水平式轉頭③粒子密度相近或相等時不宜用④密度梯度溶液中要包含所有粒子密度⑤不能用剎車四、梯度溶液的制備(一)梯度材料的選擇原則：1與被分離的生物材料不發(fā)生反應，且易與所分離的生物材料分開。2可達到要求的密度范圍，且在所要求的密度范圍內，粘度低，滲透壓低，離子強度和pH變化較小。3不會對離心設備發(fā)生腐蝕作用。4容易

4、純化，價格便宜或容易回收。5濃度便于測定，如具有折光率。6對于分析超迷離心工作來說，它的物理性質，熱力學性質應該是己知的。(二)梯度材料的應用范圍下面簡單介紹幾種常用的密度梯度材料的性質及其應用范圍。1蔗糖：水溶性大，性質穩(wěn)定，滲透壓較高，其最高密度可達133gml，且由于價格低，容易制備，是現在實驗室里常用于細胞器、病毒、RNA分離的梯度材料，但由于有較大的滲透壓，不宜用于細胞的分離。2聚蔗糖：商品名Ficoll，常采用Ficoll—

5、400也就是相對分子重量為400000，Ficoll滲透壓低，但它的粘度卻特別高，為此常與泛影葡胺混合使用以降低粘度。主要用于分離各種細胞包括血細胞、成纖維細胞、腫瘤細胞、鼠肝細胞等。3氯化銫：是一種離于性介質、水溶性大，最高密度可達1.91g／nd。由于它是重金屬鹽類，在離心時形成的梯度有較好的分辨率，被廣泛地用于DNA、質粒、病毒和脂蛋白的分離，但價格較貴。4鹵化鹽類：KBr和NaCI可用于脂蛋白分離，KI和NaI可用于RNA分離，