1、18缺血性中風(fēng)動(dòng)物模型研究缺血性中風(fēng)動(dòng)物模型研究20132013級(jí)碩士級(jí)碩士8班陳林偉陳林偉南京中醫(yī)藥大學(xué)南京中醫(yī)藥大學(xué)摘要摘要:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或細(xì)胞模型完全模擬人類的中風(fēng)十分困難，動(dòng)物模型與臨床的擬合具有重要意義。腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ蜑檠芯磕X缺血后病理過(guò)程.病理生理機(jī)制及評(píng)價(jià)潛在的治療干預(yù)效果等提供了極其重要的手段。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞:缺血性中風(fēng)；動(dòng)物模型；大腦中動(dòng)脈閉塞腦卒中，俗稱中風(fēng)，包括腦出血、腦血栓和腦梗塞等。缺血性中風(fēng)是由大腦主動(dòng)脈或其分支血

2、栓形成，或內(nèi)栓子阻塞引起，且多為大腦中動(dòng)脈(MCA)栓塞。利用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或細(xì)胞模型完全模擬人類的中風(fēng)十分困難，過(guò)去二十年，經(jīng)動(dòng)物模型研究證明有效的700多種藥物中，除一種新自由基消減劑(NXY059)外，其余全都未能在三期臨床得到陽(yáng)性結(jié)果，從而無(wú)法證明其有效性，故研究建立與人類發(fā)病機(jī)理相近、可長(zhǎng)期觀察、結(jié)果穩(wěn)定可靠、便于操作、價(jià)格低廉而實(shí)用的符合人類中風(fēng)的動(dòng)物模型成為一個(gè)迫切需要解決的問(wèn)題。1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇在新藥研發(fā)與腦缺血

3、基礎(chǔ)工作中，選擇恰當(dāng)?shù)膭?dòng)物模型是非常重要的。缺血性中風(fēng)動(dòng)物模型中使用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有兩大類：即靈長(zhǎng)類和嚙齒類。對(duì)于中風(fēng)的生理病理的了解，最初來(lái)源于中風(fēng)患者。因此，靈長(zhǎng)類動(dòng)物對(duì)中風(fēng)的基礎(chǔ)研究具有重要作用。與人類相似的多腦回靈長(zhǎng)類動(dòng)物種屬(如獼猴)，在行為和感覺(jué)運(yùn)動(dòng)整合方面與人類有密切的相似性，是中風(fēng)基礎(chǔ)研究、探索性研究和臨床前評(píng)價(jià)的最佳動(dòng)物模型。利用非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物制備模型，已有了幾十年的經(jīng)驗(yàn)積累，如狒狒。STAIR會(huì)議提出，藥物一旦用小動(dòng)物做

4、出陽(yáng)性結(jié)果，應(yīng)該在較高的物種進(jìn)行驗(yàn)證，然后才能開(kāi)始臨床試驗(yàn)[1]。最近報(bào)道，利用狨猴模型發(fā)現(xiàn)了神經(jīng)保護(hù)藥物氯美噻唑。國(guó)內(nèi)也有學(xué)者采用光化學(xué)法成功造成樹(shù)鼩局部腦缺血模型呤[2]，其造模方法亦被多人借鑒采納。但是，到目前為止，尚無(wú)標(biāo)準(zhǔn)化的、被廣泛接受的靈長(zhǎng)類動(dòng)物中風(fēng)模型。與靈長(zhǎng)類較大的動(dòng)物相比，嚙齒類動(dòng)物模型，如大鼠和小鼠，具有價(jià)格便宜、來(lái)源充足、品種純化、制作模型方法簡(jiǎn)單、存活率高、腦血管解剖和生理較接近于人類、易于監(jiān)測(cè)生理參數(shù)，腦標(biāo)本制

5、作容易等多面的優(yōu)勢(shì)[3]。但是嚙齒類動(dòng)物的大腦與人和非人靈38組間、個(gè)體內(nèi)差異，都是評(píng)價(jià)模型成功與否的關(guān)鍵。3局灶性腦缺血模型局灶性腦缺血模型3.13.1大腦中動(dòng)脈電凝阻斷模型大腦中動(dòng)脈電凝阻斷模型通過(guò)將雄性SD大鼠小顱窗暴露大腦中動(dòng)脈起始部，在大腦中動(dòng)脈靠近頸內(nèi)動(dòng)脈處將其電凝阻斷，造成供應(yīng)區(qū)缺血。為常用的永久性局灶性腦缺血模型。缺血成功率高，重復(fù)性好；但手術(shù)較復(fù)雜，且須開(kāi)顱，破壞了顱腔完整性，如操作不當(dāng)，可直接損傷腦組織。理論上可制成

6、再灌注模型，但實(shí)際操作較困難[6]。3.2大腦中動(dòng)脈線栓法再灌注模型大腦中動(dòng)脈線栓法再灌注模型首次描述了線栓法阻塞大鼠大腦中動(dòng)脈，將尼龍線自雄性SD大鼠的頸外動(dòng)脈插入，然后將線引入頸內(nèi)動(dòng)脈，使其穿過(guò)大腦中動(dòng)脈起始部，阻斷大腦中動(dòng)脈，造成大腦中動(dòng)脈供應(yīng)區(qū)血流中斷，導(dǎo)致局灶性缺血。缺血一定時(shí)間后，將栓線慢慢抽出，恢復(fù)血流進(jìn)行再灌注。此法誘發(fā)的缺血再灌注和永久性缺血性損傷程度有所差別，永久性缺血后梗死體積較短暫性缺血要大。本法無(wú)需開(kāi)顱避免了手

7、術(shù)操作對(duì)腦組織的直接刺激作用。方法簡(jiǎn)單易行，適于對(duì)再灌注損傷的病理生理機(jī)制研究。目前該法已逐漸取代開(kāi)顱法而成為最流行的方法。優(yōu)點(diǎn)是無(wú)需開(kāi)顱，屬相對(duì)非侵入的方法。缺點(diǎn)是需要一定的手術(shù)技巧，在以往復(fù)雜的操作中常出現(xiàn)動(dòng)物死亡率高、腦出血或蛛網(wǎng)膜下腔出血、梗死大小不衡定等情況。另外個(gè)體差異較大，死亡率高[7]。線栓法不利之處包括：1、血管破裂和隨后蛛網(wǎng)膜下腔出血；2、體溫過(guò)高；3、不適當(dāng)?shù)拇竽X中動(dòng)脈阻塞。栓線的有機(jī)硅涂層和激光多普勒引導(dǎo)下插線可

8、以減少蛛網(wǎng)膜下腔出血的發(fā)生。自發(fā)高熱的產(chǎn)生，被認(rèn)為發(fā)生在大多數(shù)動(dòng)物大腦中動(dòng)脈阻塞持續(xù)2h或更長(zhǎng)時(shí)間，是與下丘腦損傷有關(guān)[8]。在Longa法的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改進(jìn)，使得制作方法簡(jiǎn)便，提高了造模的成功率和可重復(fù)性，制成穩(wěn)定均一的MCAO模型[9]。具體方法為大鼠麻醉后，分離頸總動(dòng)脈(CCA)和頸外動(dòng)脈(ECA)，將鼠頭沿長(zhǎng)軸方向扭轉(zhuǎn)向左側(cè)45。，拉直ECA與頸內(nèi)動(dòng)脈的夾角。使用頭端3mm硅膠包埋制成0.260.3mm膨大的線栓，插入自CCA與