1、蚊類是多種病原體和寄生蟲的傳播媒介，能引起瘧疾、登革熱和淋巴絲蟲病等嚴重傳染性疾病，屬于重要的公共衛(wèi)生害蟲。武昌羅索線蟲（Romanomermiswuchangensis）可感染并殺死十余種庫蚊及伊蚊幼蟲，是一種很有發(fā)展前景的生物滅蚊劑。其感染庫蚊后可引發(fā)宿主體內包括模式識別受體（Pattern recognitionreceptors，PRRs）在內的多種分子參與的一系列的免疫反應。昆蟲通過PRRs識別和結合病原物的病原相關分子模式（

2、Pathogen-associated molecule patterns，PAMPs）來啟動先天性免疫反應。C型凝集素（C-type lectins，CTLs）作為一種重要的模式識別受體，在病原的識別和清除方面發(fā)揮著多種功能并扮演著重要角色。本研究對致倦庫蚊（Culex quinquefasciatus）被武昌羅索線蟲感染后的存活率進行了分析;并通過熒光定量的方法分析了致倦庫蚊被武昌羅索線蟲感染后不同時期模式識別受體基因CTL12(C

3、-type lectin12)、PGRPLC(Peptidoglycan recognition protein LC)、PGRPLE(Peptidoglycan recognition protein LE)、PGRPS1(Peptidoglycan recognitionprotein S1)、PGRPS6(Peptidoglycan recognition protein S6)，TOLL信號通路基因TOLL9A、CA CT（Ca

4、ctus），IMD(Immune deficiency)信號通路基因IMD(Immunedeficiency)、RELIA(Relish1A),JAK/STAT(Janus kinase/signal transducer andactivator transcription)信號通路基因DOME（Domeless）、HOP(Hopscotch)、STAT1A(Signal transducer and activator of tra

5、nscription1A)，凝結黑化途徑基因SRPN6(Serine proteinase inhibitor6)、CLIPC2(Clip-domain serine protease C2)，免疫效應分子基因PPO2(Prophenoloxidase2)、PPO5（Prophenoloxidase5）、CECA2（Cecropin2），自噬途徑基因ATG5（Autophagy-related protein5）、ATG8（Autoph

6、agy-related protein8)等19個免疫相關基因的表達情況;篩選出顯著下調表達的免疫基因CTL12，并對其進行了蛋白原核表達和體外功能實驗，初步探究了致倦庫蚊CqCTL12基因在其抵御細菌和線蟲感染的免疫反應中的功能和作用。實驗結果如下:
　　1.致倦庫蚊被武昌羅索線蟲感染后的存活率分析。結果發(fā)現(xiàn)6天后感染組孑孓的存活率極顯著低于對照組(p＜0.001)，表明武昌羅索線蟲對致倦庫蚊具有較高的致死率。
　　2.致

7、倦庫蚊被線蟲感染后不同時期免疫基因的表達水平分析。結果表明:CTL12和PGRPLC在線蟲寄生的初期（2天、4天）呈顯著性下調表達(p＜0.05)，推測其可能在庫蚊抵御線蟲入侵的過程中起著關鍵作用;而ATG5和ATG8在線蟲寄生的晚期（6天）呈顯著性上調表達(p＜0.05)，推測在線蟲寄生的后期庫蚊體內可能出現(xiàn)了大量自噬現(xiàn)象。
　　3.CqCTL12和CqATG8基因的序列分析。結果顯示:CqCTL12基因包含486個核苷酸序列，

8、編碼162個氨基酸，蛋白分子量約為16.04kDa，含有典型的CRD結構域，其CRD結構域包括4個保守的半胱氨酸和1個Ca2+結合位點，在Ca+結合位點中含有一個可結合半乳糖的QLD基序和一個與Ca2+依賴活性相關的WND基序;CqATG8長為357bp，編碼118個氨基酸，蛋白分子量為14.056kDa。
　　4.原核表達純化獲得重組蛋白rCqCTL12和rCqATG8。rCqCTL12對細菌的凝集實驗表明: rCqCTL12能

9、顯著凝集革蘭氏陰性菌Escherichia coli和革蘭氏陽性菌Staphylococcus aureus，具有典型的Ca2+依賴效應。
　　5.rCqCTL12與武昌羅索線蟲感染期幼蟲的體外結合。實驗表明:rCqCTL12能在體外與甲醛殺死的及活體狀態(tài)下的感染期幼線蟲結合，且這種結合與Ca+存在與否無關。
　　上述實驗結果表明，包括CqCTL12在內的致倦庫蚊多種免疫基因在抵御線蟲和細菌侵染過程中發(fā)揮著重要作用。研究結果