1、乙酰膽堿酯酶(Acetylcholinesterase，AChE)是動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的一種催化酶，參與細(xì)胞的發(fā)育和成熟，能夠促進(jìn)神經(jīng)元的發(fā)育和神經(jīng)的再生。乙酰膽堿是乙酰膽堿酯酶的水解底物，是中樞膽堿能系統(tǒng)中重要的神經(jīng)遞質(zhì)之一，其主要功能是維持意識(shí)的清醒，在學(xué)習(xí)和記憶中起重要作用。人的腦組織中有大量的乙酰膽堿，但乙酰膽堿的含量會(huì)隨著年齡的增加而出現(xiàn)下降。有機(jī)磷與AChE結(jié)合會(huì)形成磷?；疌hE。磷?；疌hE很穩(wěn)定，使酶失去催化水解乙酰膽堿

2、的能力并逐漸老化，引起乙酰膽堿積聚，最終導(dǎo)致膽堿能神經(jīng)先興奮后抑制。阿爾茨海默病AD即老年癡呆癥，是一種神經(jīng)衰退癥，嚴(yán)重影響人的認(rèn)知、記憶、情感等功能。世界較為認(rèn)可的AD病理為大腦內(nèi)乙酰膽堿的缺失。目前，全世界的患病者已達(dá)到一千七百到二千五百萬(wàn)，給家庭和社會(huì)造成嚴(yán)重的負(fù)擔(dān)。所以實(shí)現(xiàn)對(duì)影響乙酰膽堿酯酶活性以及與其相關(guān)物質(zhì)的準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)單的檢測(cè)，對(duì)于AD和很多神經(jīng)疾病的發(fā)病機(jī)理研究及早期診斷治療非常重要。因此，開(kāi)發(fā)一些易于操作、價(jià)格低廉且

3、又精確有效的乙酰膽堿酯酶?jìng)鞲屑夹g(shù)意義重大。
　　酶?jìng)鞲衅骷夹g(shù)因具有選擇性好、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用。納米金作為研究和應(yīng)用最廣泛的納米材料之一，具有獨(dú)特的光學(xué)、電學(xué)和催化性質(zhì)。本文中，我們將酶?jìng)鞲衅骱图{米金信號(hào)放大技術(shù)有機(jī)地結(jié)合起來(lái)，構(gòu)建了電化學(xué)和液晶酶?jìng)鞲衅?，?shí)現(xiàn)對(duì)乙酰膽堿酯酶抑制劑、乙酰膽堿酯酶底物和乙酰膽堿酯酶抗體的靈敏檢測(cè)。主要內(nèi)容如下：
　　(1)設(shè)計(jì)了利用乙酰膽堿酯酶的催化活性，水解底物氯化硫代乙酰

4、膽堿生成硫代膽堿。硫代膽堿具有還原性，能夠還原氯金酸生成納米金顆粒。再將納米金粒子作為銅沉積的催化劑和種子。銅納米粒子在納米金顆粒上長(zhǎng)大后，利用溶出伏安法將沉積了的銅溶出。然后通過(guò)線性伏安掃描法定量檢測(cè)沉積的銅得到的電化學(xué)溶出峰，來(lái)檢測(cè)乙酰膽堿酯酶抑制劑有機(jī)磷，其濃度和減弱的溶出峰信號(hào)成正比。有機(jī)磷的檢測(cè)下限達(dá)到0.02 ng/mL。(第二章)
　　(2)利用納米金沉積信號(hào)放大的乙酰膽堿酯酶液晶傳感器，實(shí)現(xiàn)對(duì)乙酰膽堿酯酶底物乙酰膽

5、堿和乙酰膽堿酯酶抑制劑有機(jī)磷農(nóng)藥的低濃度檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)中利用氯化硫代乙酰膽堿與乙酰膽堿競(jìng)爭(zhēng)與酶的結(jié)合，調(diào)控硫代膽堿還原生成的納米金顆粒，來(lái)擾亂液晶分子的有序性排列，引起液晶的偏光效應(yīng)。在偏光顯微鏡下觀察，獲得的偏光圖像實(shí)現(xiàn)對(duì)乙酰膽堿的簡(jiǎn)單、靈敏、有效的檢測(cè)，檢測(cè)下限達(dá)到15nM/mL。乙酰膽堿酯酶的水解催化活性受有機(jī)磷農(nóng)藥的特異性抑制，可以將其作為監(jiān)控有機(jī)磷農(nóng)藥的靶標(biāo)物質(zhì)。有機(jī)磷農(nóng)藥抑制酶的水解活性，減弱酶對(duì)底物的水解，還原劑硫代膽堿就會(huì)相

6、應(yīng)減少，從而導(dǎo)致納米金顆粒數(shù)量的減少，對(duì)液晶有序性的擾亂度也減弱，偏光效應(yīng)也相應(yīng)的減弱，最終實(shí)現(xiàn)對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥的檢測(cè)，檢測(cè)下限達(dá)到0.1 ng/mL。此方法是一種簡(jiǎn)單、直觀、快速且較靈敏地適用于乙酰膽堿和有機(jī)磷農(nóng)藥檢測(cè)的技術(shù)，具有較強(qiáng)的通用性。(第三章)
　　(3)建立了一種基于乙酰膽堿抗體催化活性的液晶傳感器檢測(cè)方法。該法考察了乙酰膽堿抗體酶具有和酶相似催化水解活性的特點(diǎn)，水解硫代乙酰膽堿，生成具有還原性的硫代膽堿，硫代膽堿還原氯