1、謹以此論文獻給一直關懷與支持我的導師、朋友及家人!基于傳統(tǒng)純培養(yǎng)及宏基因組文庫方法研究海洋來源蛋白酶及微生物多樣性基于傳統(tǒng)純培養(yǎng)及宏基因組文庫方法研究海洋來源蛋白酶及微生物多樣性捅要近年來，工業(yè)酶市場逐年增加，2 0 1 1 年其市場總值達3 5 億美元，且以每年6 ．1 ％的速度增長。蛋白酶作為最為重要的工業(yè)酶之一，占到了整個工業(yè)酶市場的6 5 ％，且廣泛應用于食品、醫(yī)藥、洗滌、制革、化妝品等行業(yè)中。盡管已經(jīng)有大量關于蛋白酶的研究和應

2、用的報道，尋找新型的功能特殊的蛋白酶仍然十分重要，特別是針對海洋水產(chǎn)蛋白的處理，需要特殊的蛋白酶以形成口感風味等。目前，由于微生物具有生長快速，穩(wěn)定且產(chǎn)酶能力強等特點，蛋白酶主要來源于微生物的發(fā)酵。而海洋中蘊藏著巨大的微生物資源，這些資源沒有得到有效的開發(fā)利用，是尋找新型生物資源的優(yōu)良場所。本文以海洋微生物資源為主要研究對象，通過傳統(tǒng)的微生物純培養(yǎng)方法和宏基因組學的方法，研究海洋來源的蛋白酶資源。主要研究內容包括以下三個方面：1 ) 篩

3、選南海沉積物中產(chǎn)蛋白酶微生物并對南海微生物多樣性進行初步分析：共篩選了南海2 3 個位點的產(chǎn)蛋白酶微生物共獲得7 6 株產(chǎn)蛋白酶微生物，其中有高溫菌( 5 0 ℃) 2 7 株，常溫菌( 2 8 ℃) 3 4 株，低溫菌( 1 0 ℃) 1 5 株。微生物1 6 S鑒定顯示己篩選的產(chǎn)酶菌株主要包含芽孢桿菌屬、假單胞菌屬、放線菌屬等。微生物多樣性通過擴增1 6 S V 4 區(qū)并測序分析，1 9 個不同位點的南海樣品，平均獲得3 5 8 7

4、 條有效片段，平均O T U 聚類數(shù)為1 4 9 2 ，說明該區(qū)域具有大量的微生物資源。在所有的微生物，主要為變形菌門和泉古菌門，其次為浮霉菌門和厚壁菌門等。同時，微生物群落的0 【．多樣性和B ．多樣性分析也表明南海1 9 個不同位點的微生物多樣性具有較大的差異。2 ) 分離純化了微球菌N H 5 4 P C 0 2 所產(chǎn)的堿性蛋白酶并研究了酶學性質及其在水產(chǎn)品上的應用：純化的步驟共三步，包括：硫酸銨沉淀，D E A E ．弱陰離子交