1、在以實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為主要研究對(duì)象的科學(xué)研究中，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的遺傳質(zhì)量是影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果真實(shí)性的重要因素。在動(dòng)物繁育和飼養(yǎng)過(guò)程中，遺傳漂變和遺傳污染等多種因素會(huì)造成實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳質(zhì)量的改變，這會(huì)直接影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生物學(xué)特性，進(jìn)而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可重復(fù)性和準(zhǔn)確性。因此，必須采用遺傳監(jiān)測(cè)來(lái)監(jiān)控實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的遺傳質(zhì)量，確保實(shí)驗(yàn)動(dòng)物品系的純度和同質(zhì)性，同時(shí)對(duì)不符合標(biāo)準(zhǔn)的群體及時(shí)淘汰，對(duì)新出現(xiàn)的亞系分支或突變品系及時(shí)進(jìn)行正確處理。這對(duì)確保動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果的可靠性等具有十

2、分重要的理論及實(shí)踐意義。
　　目前利用微衛(wèi)星與SNP進(jìn)行遺傳檢測(cè)的報(bào)道均各有側(cè)重，對(duì)常見大鼠和小鼠品系的檢測(cè)不夠完善系統(tǒng)。所以有必要重新優(yōu)選這些標(biāo)記，建立針對(duì)常用大鼠和小鼠品系進(jìn)行遺傳監(jiān)測(cè)的新優(yōu)化體系，進(jìn)而利用該體系對(duì)相關(guān)品系進(jìn)行系統(tǒng)的檢測(cè)來(lái)確定其變異程度以及是否有亞系形成。另外，目前國(guó)際上對(duì)基因修飾動(dòng)物的遺傳監(jiān)測(cè)鮮有報(bào)道，尤其是對(duì)當(dāng)今具最高免疫缺陷的X小鼠，其基因修飾是否會(huì)造成遺傳監(jiān)測(cè)標(biāo)記的變異，這些變異的遺傳監(jiān)測(cè)標(biāo)記與基因修飾

3、間存在怎樣的分子生物學(xué)關(guān)系，以及怎樣利用這些標(biāo)記對(duì)基因修飾動(dòng)物進(jìn)行遺傳監(jiān)測(cè)尚未見有報(bào)道。
　　本課題首先用微衛(wèi)星作為遺傳監(jiān)測(cè)手段，經(jīng)對(duì)PCR檢測(cè)條件的優(yōu)化改良，希望建立一套可以對(duì)5種小鼠和3種大鼠品系進(jìn)行遺傳監(jiān)測(cè)的穩(wěn)定可靠的監(jiān)測(cè)體系。進(jìn)而希望用所建立的微衛(wèi)星監(jiān)測(cè)體系對(duì)幾個(gè)品系小鼠和近交系大鼠監(jiān)測(cè)分析其遺傳質(zhì)量。然后，我們利用SNP作為遺傳監(jiān)測(cè)手段，篩選了分布于不同染色體的32個(gè)SNP位點(diǎn)對(duì)8個(gè)品系的小鼠（包括5個(gè)近交系、2個(gè)具免疫

4、缺陷的突變系及相應(yīng)的背景品系）進(jìn)行了相應(yīng)群體的遺傳監(jiān)測(cè)分析，希望得到近交系的變異程度以及在突變系中與遺傳修飾相關(guān)的多態(tài)性位點(diǎn)。通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)我們得到以下結(jié)果:
　　1、通過(guò)篩選數(shù)據(jù)庫(kù)，并優(yōu)化PCR反應(yīng)及瓊脂糖凝膠電泳條件，最后經(jīng)改良建立了一種穩(wěn)定可靠的微衛(wèi)星檢測(cè)分析方法，并建立了基于該方法的適合于5種近交系小鼠和3種近交系大鼠進(jìn)行遺傳監(jiān)測(cè)鑒定的微衛(wèi)星集合，進(jìn)一步給出針對(duì)不同近交系遺傳監(jiān)測(cè)鑒定的最優(yōu)微衛(wèi)星使用組合。該檢測(cè)體系可以對(duì)涉及

5、到的大鼠與小鼠近交系進(jìn)行系統(tǒng)快捷準(zhǔn)確的檢測(cè)鑒定，這對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳監(jiān)測(cè)鑒定具有重要價(jià)值。
　　2、利用建立的微衛(wèi)星檢測(cè)體系對(duì)相關(guān)小鼠與大鼠品系進(jìn)行遺傳監(jiān)測(cè)，發(fā)現(xiàn)了一些分布于不同品系內(nèi)的變異微衛(wèi)星位點(diǎn)。這些變異位點(diǎn)可能是亞系形成過(guò)程的一種表征。
　　3、利用建立的檢測(cè)體系，對(duì)免疫缺陷突變系X小鼠選擇了24個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，未發(fā)現(xiàn)X小鼠不同于背景小鼠的變異位點(diǎn)。說(shuō)明在所選的24個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)中沒有與相關(guān)基因突變有關(guān)的敏感位點(diǎn)。<

6、br>　　4、用優(yōu)選的32個(gè)SNP探針對(duì)5個(gè)近交系小鼠相關(guān)群體進(jìn)行Q-PCR基因分型檢測(cè)發(fā)現(xiàn):①對(duì)于生產(chǎn)群， BALB/c小鼠在rs13483601(A/A→A/G)、rs13459176(A/A→A/C)與rs13482131(C/C→ C/T)位點(diǎn)發(fā)生突變; C3H小鼠在rs13459176(A/A→A/C)與rs13482131(C/C→ C/T)位點(diǎn)發(fā)生突變; DBA/2小鼠在rs13483295(T/T→G/T)位點(diǎn)發(fā)生突變;

7、 C57BL/6小鼠在rs3653651(C/C→C/T)、rs13459176(A/A→A/C)與rs13482131(C/C→ C/T)位點(diǎn)發(fā)生突變;129小鼠在30個(gè)檢測(cè)位點(diǎn)均未發(fā)生突變;②對(duì)于核心群，在30個(gè)所檢位點(diǎn)中僅rs13459176位點(diǎn)在C57BL/6、C3H、BALB/c小鼠部分樣本中檢測(cè)到雜合突變（A/A→A/C）。
　　5、以BALB/c小鼠為背景對(duì)照，對(duì)BALB/c Nude小鼠進(jìn)行SNP基因分型檢測(cè)發(fā)現(xiàn):

8、BALB/c Nude小鼠在rs13478818、rs13482843等7個(gè)位點(diǎn)發(fā)生突變。以背景小鼠為對(duì)照，對(duì)X小鼠進(jìn)行SNP基因分型檢測(cè)發(fā)現(xiàn):X小鼠只在rs13478215位點(diǎn)發(fā)生突變（C/C→C/A; C/C→A/A），其他位點(diǎn)均與背景小鼠一致。這些位點(diǎn)的多態(tài)性表明其很可能是與基因修飾相關(guān)的一些“熱點(diǎn)”。
　　結(jié)論:
　　1、建立的微衛(wèi)星遺傳監(jiān)測(cè)鑒定體系是穩(wěn)定可靠的。利用該體系對(duì)3種近交系大鼠與5種近交系小鼠進(jìn)行檢測(cè)鑒定

9、發(fā)現(xiàn)了分布于這些動(dòng)物中的一些突變位點(diǎn)。這表明這些近交系可能正逐漸分化為亞系或發(fā)生了遺傳污染。對(duì)于發(fā)生了遺傳污染或不需要的突變?nèi)后w應(yīng)及時(shí)淘汰，并重新引種或復(fù)蘇凍存的胚胎重新擴(kuò)繁。這對(duì)保證動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性與精確性有重要意義。
　　2、對(duì)X免疫缺陷小鼠進(jìn)行了24個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的檢測(cè)，未發(fā)現(xiàn)X小鼠不同于背景小鼠的變異。說(shuō)明所選的24個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)都沒有發(fā)生與基因修飾有關(guān)的突變。對(duì)X免疫缺陷小鼠中與突變基因相關(guān)的敏感微衛(wèi)星位點(diǎn)的檢測(cè)尚屬首次，這

10、對(duì)研究這些位點(diǎn)與所敲除免疫基因間的分子生物學(xué)機(jī)制具有重要借鑒價(jià)值。
　　3、通過(guò)SNP基因分型實(shí)驗(yàn)對(duì)小鼠進(jìn)行檢測(cè)后發(fā)現(xiàn):5個(gè)近交系小鼠核心群的變異位點(diǎn)數(shù)目要低于生產(chǎn)群，這與核心群嚴(yán)格控制繁殖代數(shù)使其整體擴(kuò)繁代數(shù)要低于生產(chǎn)群有關(guān)。而對(duì)于新出現(xiàn)欲保留的亞系應(yīng)及時(shí)配純并建立詳細(xì)檔案資料。
　　4、通過(guò)SNP基因分型實(shí)驗(yàn)檢測(cè)到存在于BALB/c Nude小鼠中的7個(gè)位點(diǎn)與其背景小鼠相比發(fā)生變異。進(jìn)一步對(duì)X免疫缺陷小鼠的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)在rs