家蠅短型肽聚糖識(shí)別蛋白基因的克隆與功能鑒定.pdf_第1頁(yè)
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1、家蠅在地球上廣泛分布,常常生長(zhǎng)在病菌滋生的環(huán)境中,對(duì)環(huán)境的適應(yīng)能力很強(qiáng)。肽聚糖識(shí)別蛋白(PGRPs)是先天免疫分子,存在于昆蟲(chóng),軟體動(dòng)物,棘皮動(dòng)物和脊椎動(dòng)物之中,而不存在于線(xiàn)蟲(chóng)和植物中。它可以與細(xì)菌細(xì)胞壁的主要成分肽聚糖結(jié)合,通過(guò)激活Toll或Imd信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,或誘導(dǎo)蛋白水解級(jí)聯(lián)反應(yīng)產(chǎn)生抗菌蛋白,引起吞噬作用,水解肽聚糖來(lái)抵擋感染。對(duì)家蠅肽聚糖識(shí)別蛋白功能的研究對(duì)了解家蠅的抗菌機(jī)制有著重要意義。本文以家蠅為研究對(duì)象,研究?jī)?nèi)容主要包括以

2、下兩個(gè)部分:
  第1部分:通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行搜索,發(fā)現(xiàn)了5條新的肽聚糖識(shí)別蛋白基因序列,使用 PCR技術(shù)對(duì)其序列進(jìn)行驗(yàn)證,通過(guò)同源比對(duì)分別命名為MdPGRP-SA、MdPGRP-SB、MdPGRP-SC2、MdPGRP-SC3和MdPGRP-SD,并對(duì)其核苷酸和編碼的蛋白序列進(jìn)行了生物信息學(xué)分析。
  第2部分:以管家基因β-actin作為內(nèi)參分子,利用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR(RT-qPCR)方法對(duì)經(jīng)過(guò)金黃色葡萄球菌和大

3、腸桿菌刺激后的家蠅以及不同組織,不同發(fā)育階段的家蠅中PGRP基因的mRNA表達(dá)水平進(jìn)行了定量研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與對(duì)照組相比MdPGRP-SA、MdPGRP-SB和MdPGRP-SD在金黃色葡萄球菌刺激后發(fā)生表達(dá)上調(diào),隨后出現(xiàn)一個(gè)恢復(fù),最后再次顯著上調(diào);在大腸桿菌刺激后,MdPGRP-SA在后期發(fā)生上調(diào),而MdPGRP-SB和MdPGRP-SD基因在刺激初期發(fā)生上調(diào),隨后表達(dá)逐漸恢復(fù)正常。MdPGRP-SC2和MdPGRP-SC3在金黃色葡

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