1、西南醫(yī)科大學碩士學位論文中圖分類號：中圖分類號：R737.33碩士學位論文miRmiR4974975p5p下調(diào)下調(diào)IKCa1IKCa1基因表達對基因表達對宮頸癌宮頸癌HelaHela細胞細胞增殖增殖的影響的影響院（系）、所院（系）、所臨床醫(yī)學院研究生姓名研究生姓名張君學科、專學科、專業(yè)婦產(chǎn)科學導(dǎo)師姓導(dǎo)師姓名毛熙光學位類型科學學位二〇一〇一七年三月年三月西南醫(yī)科大學碩士學位論文miRmiR4974975p5p下調(diào)下調(diào)IKCa1IKCa1基

2、因表達對基因表達對宮頸癌宮頸癌HelaHela細胞細胞增殖增殖的影響的影響摘要目的：目的：IKCa1基因在宮頸癌中呈高表達，影響宮頸癌Hela細胞的增殖和凋亡[1]。本實驗的主要目的是通過生物信息學在線軟件對IKCa1基因進行miRNA預(yù)測，探討候選miRNA在轉(zhuǎn)錄后水平對IKCa1基因的調(diào)控作用，并檢測候選miRNA過表達后對宮頸癌Hela細胞增殖活性的影響。方法方法:1.利用生物信息學在線軟件starBaseV2.0進行IKCa1基

3、因上游miRNA預(yù)測，通過文獻查閱，并選定其中一個作為研究對象。2.為了檢驗候選miRNA能否直接作用于IKCa1mRNA3’UTR采用雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)檢測候選的miRNA與IKCa1mRNA3’UTR相互作用對熒光素酶活性的影響。3.確認候選miRNA能夠靶向調(diào)控IKCa1基因后，對Hela細胞進行轉(zhuǎn)染，應(yīng)用PCR技術(shù)和Westernbolt法檢測IKCa1mRNA和蛋白表達水平，檢驗候選miRNA在轉(zhuǎn)錄后水平對IKCa1基

4、因表達的影響。4.采用CCK8法檢測候選miRNA對Hela細胞增殖活性的影響。結(jié)果：結(jié)果：1.在生物信息學軟件starBaseV2.0所預(yù)測的miRNAs中，通過文獻查閱后，選定miR4975p作為研究對象進行后續(xù)實驗。2.雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)的檢測結(jié)果顯示miR4975pmimics和IKCa1wt共轉(zhuǎn)染組Hela細胞的熒光素酶活性顯著降低。3.PCR結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染miR4975pmimics的Hela細胞中IKCa1mRNA表