1、目的：
　　非酒精性脂肪肝病（NAFLD）的患病率逐年上升，已成為最常見的慢性肝臟疾病。根據(jù)疾病嚴重程度，NAFLD可包括以下類型：單純性肝脂肪病變，非酒精性肝炎，肝纖維化，肝細胞肝癌。目前普遍認為NAFLD的發(fā)生涉及飲食、遺傳、腸道微生物等因素，它們可作為“多重打擊”共同影響脂肪代謝、炎癥及纖維化的形成，從而引起肝毒性。
　　本研究室前期采用飛行質(zhì)譜技術在慢性肝炎、肝硬化和肝癌患者血清中檢測到一種生物學標志物：真核肽鏈釋放

2、因子3b（eRF3b）多肽，該標志物在不同類型患者體內(nèi)表達有差異。前期研究發(fā)現(xiàn)eRF3b對免疫性肝損傷、肝纖維化均有保護作用。
　　基于本實驗室前期關于eRF3b對NAFLD保護性作用的研究，發(fā)現(xiàn)eRF3b可減輕高脂飲食聯(lián)合四氯化碳導致的大鼠肝內(nèi)脂肪沉積，改善血清學和組織病理學指標，但是eRF3b發(fā)揮保護作用的具體分子機制尚不明確，所以本次研究主要通過腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）通路、過氧化物酶體增殖物激活受體/肝X受體（PPA

3、R/LXR）通路和磷脂酰肌醇-3激酶/蘇氨酸蛋白激酶（PI3K/Akt）通路來探索eRF3b對非酒精性脂肪肝病的保護作用的脂肪代謝機制，從而為非酒精性脂肪肝病的治療提供實驗室依據(jù)。
　　方法：
　　1.脂肪代謝通路相關因子基因表達水平變化：
　　應用qRT-PCR方法測定正常組、模型組、eRF3b100μg/kg組、200μg/kg組、400μg/kg組、西藥（復方甘草酸苷）對照組、中藥（降脂通絡軟膠囊）對照組凍存肝組

4、織中AMPK通路相關指標adiponectin、LKB1、AMPKα1、AMPKα2、ACC、CPT1、SREBP-1c、FAS、PNPLA3；PPAR/LXR通路指標PPARα、PPARγ、LXRα；炎癥、纖維化與細胞增殖指標IL-6、TGF-β1、collagen1、PCNA的基因表達水平。
　　2.幾種相關因子蛋白水平的變化：
　　應用Western-blot方法測定正常組、模型組、eRF3b100μg/kg組、200

5、μg/kg組、400μg/kg組、復方甘草酸苷組、降脂通絡軟膠囊組凍存肝組織中的p-AMPKα/AMPKα、PI3K、p-Akt/Akt蛋白表達水平。
　　結果：
　　1.各組AMPKα的基因及蛋白表達水平
　　qRT-PCR結果顯示模型組與正常組比AMPKα1、AMPKα2 mRNA相對表達均降低（P<0.01），eRF3b100μg/kg、200μg/kg、400μg/kg組、復方甘草酸苷組、降脂通絡軟膠囊組與模型

6、組比，AMPKα1、AMPKα2 mRNA相對表達均升高（P<0.01）。eRF3b200μg/kg組AMPKa1和AMPKα2 mRNA表達高于復方甘草酸苷組和降脂通絡軟膠囊組（P<0.05）。Western-blot結果顯示模型組p-AMPKα/AMPKα蛋白相對表達量低于正常組（P<0.01）， eRF3b200μg/kg組與模型組比p-AMPKα/AMPKα蛋白相對表達量升高（P<0.05）。
　　2.各組AMPK上游基因

7、的表達水平
　　與正常組比，模型組adiponectin與LKB1 mRNA相對表達量均降低（P<0.05），eRF3b200μg/kg組adiponectin和LKB1 mRNA相對表達量均高于模型組（P<0.01）。
　　3.各組脂肪酸氧化相關基因的表達水平
　　與正常組比，模型組ACC mRNA相對表達升高，CPT1 mRNA相對表達降低（P<0.001）。與模型組比，eRF3b100μg/kg、200μg/kg

8、、400μg/kg組、復方甘草酸苷組、降脂通絡軟膠囊組ACC mRNA相對表達量降低， CPT1 mRNA相對表達升高，且eRF3b400μg/kg組ACC mRNA表達低于與復方甘草酸苷組（P<0.05）。
　　4.各組脂肪酸合成相關基因的表達水平
　　與正常組比，模型組SREBP-1c、PNPLA3、FAS mRNA相對量表達均升高（P<0.05）。與模型組比，eRF3b100μg/kg、200μg/kg、400μg/k

9、g組、復方甘草酸苷組、降脂通絡軟膠囊組SREBP-1c、FAS、PNPLA3 mRNA表達均降低（P<0.05），且eRF3b200μg/kg組和400μg/kg組SREBP-1c mRNA水平低于復方甘草酸苷組（P<0.05）。
　　5.各組PPAR/LXR通路的基因表達水平
　　正常組、模型組、eRF3b100μg/kg組、200μg/kg組、400μg/kg組、復方甘草酸苷組、降脂通絡軟膠囊組的PPARα與LXRα基因

10、相對表達水平均無差異（P>0.05）。模型組PPARγmRNA水平高于正常組（P<0.001），與模型組比，eRF3b200μg/kg組與降脂通絡軟膠囊組PPARγmRNA相對表達量降低（P<0.05）。
　　6.各組PI3K/Akt通路的蛋白表達水平
　　Western blot結果顯示，正常組、模型組、eRF3b100μg/kg、200μg/kg、400μg/kg組、復方甘草酸苷組、降脂通絡軟膠囊組PI3K和p-Akt/

11、Akt的蛋白相對表達量均無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。
　　7.各組炎癥、纖維化及細胞增殖相關基因的表達水平
　　與正常組比，模型組IL-6、TGF-β1、collagen1 mRNA相對表達均升高（P<0.01）。與模型組比，eRF3b100μg/kg、200μg/kg、400μg/kg組、西藥組、中藥組IL-6和TGF-β1 mRNA表達降低（P<0.05）；eRF3b100μg/kg、200μg/kg組、復方甘草酸苷組

12、、降脂通絡軟膠囊組collagen1 mRNA表達降低（P<0.01），且eRF3b200μg/kg組IL-6和collagen1基因水平低于復方甘草酸苷組和降脂通絡軟膠囊組（P<0.01）。各組PCNA的基因表達無統(tǒng)計學差異（P>0.05）。
　　結論：
　　1.eRF3b可能通過激活AMPK通路，降低肝內(nèi)PPARγ的表達而改善脂代謝并減輕由高脂飲食聯(lián)合四氯化碳引起的大鼠肝臟炎癥反應與纖維化的發(fā)生，發(fā)揮對脂肪肝的保護作用。