1、骨質(zhì)疏松(Osteoporosis,OP)是一種伴隨著骨量降低和骨微觀結(jié)構(gòu)退化從而導(dǎo)致骨易碎性,骨折發(fā)生增加的系統(tǒng)性骨骼性疾病,是一種常見多發(fā)病。其早期癥狀不明顯,大多數(shù)患者直到發(fā)生骨質(zhì)疏松性骨折,嚴(yán)重影響患者的健康和生活質(zhì)量。目前治療骨質(zhì)疏松的藥物中相當(dāng)一部分藥物給患者帶來副作用。故探究治療骨質(zhì)疏松的作用機(jī)制及尋找高效低毒的天然藥物有著重要的意義。
　　葛根(Pueraria Lobata)是野葛或干葛藤的根,屬于爬行類豆科植物

2、。具有解熱抗炎,降低血管阻力增加冠狀血流量等多種功效。文獻(xiàn)報道,異黃酮(Isoflavones)是黃酮化合物中的一種,對骨質(zhì)疏松的治療有確切療效。本課題采用卵巢去勢手術(shù)和糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)大鼠骨質(zhì)疏松模型,探究葛根總黃酮(total flavones of Pueraria Lobata,TFPL)對骨質(zhì)疏松的保護(hù)作用及可能的機(jī)制。
　　目的：
　　本研究通過建立卵巢去勢手術(shù)和糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的大鼠骨質(zhì)疏松模型研究葛根總黃酮(to

3、tal flavones of Pueraria Lobata,TFPL)對骨質(zhì)疏松的保護(hù)作用,并探討可能的作用機(jī)制。
　　內(nèi)容：
　　1.通過去勢手術(shù)誘導(dǎo)大鼠骨質(zhì)疏松模型,觀察葛根總黃酮對去勢大鼠骨質(zhì)疏松的作用。
　　2.通過醋酸潑尼松誘導(dǎo)大鼠繼發(fā)性骨質(zhì)疏松模型,觀察葛根總黃酮對醋酸潑尼松誘導(dǎo)大鼠骨質(zhì)疏松的作用。
　　方法：
　　1.采用卵巢去勢手術(shù)誘導(dǎo)大鼠骨質(zhì)疏松模型,隨機(jī)分為正常組、去勢模型組、假手術(shù)

4、組、替勃龍組(1.25 mg/kg)和葛根總黃酮(50、100、200 mg/kg)給藥組。給予葛根總黃酮12周的治療后,對藥效指標(biāo)進(jìn)行研究與評價。
　　(1)測量大鼠子宮濕重和子宮指數(shù)。
　　(2)雙能X射線骨密度儀測定各組大鼠右股骨骨密度(bone minernal density,BMD)和骨礦物含量(bone minernal content,BMC)。
　　(3)三點(diǎn)彎曲實驗測左股骨生物力學(xué)的性能。
　

5、　(4)左脛骨HE染色做組織形態(tài)學(xué)分析,觀察大鼠骨組織微觀結(jié)構(gòu)的變化。
　　(5)ELISA法測尿液的羥脯氨酸(hydroxyproline,HOP)、血清骨特異性堿性磷酸酶（bone specific alkaline phosphatase,BALP)、卵泡生成素(follicle-stimulating hormone,FSH)、黃體生成素(luteotropic hormone,LH)和雌激素(estrogen,E2)水平

6、。
　　(6) RT-PCR法檢測下丘腦促性腺激素釋放激素（gonadotropin-releasing hormone,GnRH)、雌激素受體α(estrogen receptorα,ERα)和雌激素受體β(estrogen receptorβ,ERβ)mRNA的水平。
　　2.采用醋酸潑尼松誘導(dǎo)大鼠骨質(zhì)疏松模型,隨機(jī)分為正常組,醋酸潑尼松模型組,葛根總黃酮(50、100、200 mg/kg)給藥組和替勃龍組(1.25mg

7、/kg)。給予葛根總黃酮12周的治療后檢測指標(biāo)如下:
　　(1)雙能X射線骨密度儀測定各組大鼠腰椎(L3-L4)骨密度(BMD)和骨礦物含量(BMC)。
　　(2)三點(diǎn)彎曲實驗測左股骨生物力學(xué)的性能。
　　(3)左脛骨和右腎上腺HE染色做病理組織形態(tài)學(xué)分析。
　　(4)ELISA法測尿液的羥脯氨酸(HOP)和血清骨特異性堿性磷酸酶(BALP)水平。
　　(5)RT-PCR法檢測下丘腦促性腺激素釋放激素(Gn

8、RH)、腎上腺皮質(zhì)激素(CRH)、雌激素受體α(ERα)和雌激素受體β(ERβ)mRNA的水平。
　　結(jié)果：
　　1.去勢模型組大鼠子宮濕重和子宮指數(shù)均顯著降低,提示去勢手術(shù)模型成功。
　　2.葛根總黃酮顯著增加去勢大鼠右股骨BMD和BMC、左股骨最大荷載、提高骨干重,骨灰重和骨灰重/骨干重。提示葛根總黃酮可改善去勢手術(shù)引起的骨量和骨生物力學(xué)性能的降低。
　　3.葛根總黃酮使去勢大鼠骨小梁變粗變密,骨的連續(xù)性好,

9、排列尚規(guī)則,成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。且給藥后可顯著升高去勢大鼠左脛骨平均骨小梁厚度和平均骨體積分?jǐn)?shù),并降低平均骨小梁間距,提示葛根總黃酮可顯著增強(qiáng)保持骨微觀結(jié)構(gòu)。
　　4.葛根總黃酮可顯著降低去勢大鼠尿HOP和血清BALP、FSH和LH水平,提示葛根總黃酮可能是通過調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-性腺軸來調(diào)節(jié)FSH,降低骨代謝。
　　5.葛根總黃酮給藥后,去勢大鼠下丘腦GnRH,ERα和ERβmRNA水平的表達(dá)明顯上調(diào)。
　　6.經(jīng)過12周的醋

10、酸潑尼松給藥后,大鼠的腰椎體(L4-L5)的BMD和BMC顯著降低提示造模成功,葛根總黃酮可顯著提高醋酸潑尼松誘導(dǎo)性大鼠腰椎(L4-L5)的BMD和BMC、左股骨生物力學(xué)性能、右肱骨骨干重、骨灰重和骨灰重/骨干重。
　　7.葛根總黃酮不僅可使醋酸潑尼松誘導(dǎo)大鼠骨小梁變粗變密,厚度較均勻,保持立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),還可以使腎上腺保持球狀帶、束狀帶和網(wǎng)狀帶形態(tài)規(guī)則,厚度均勻。
　　8.葛根總黃酮可顯著降低醋酸潑尼松誘導(dǎo)大鼠尿 HOP和血

11、清 BALP水平,提示葛根總黃酮可降低骨轉(zhuǎn)換。
　　9.經(jīng)過12周的給藥后,葛根總黃酮可顯著上調(diào)醋酸潑尼松誘導(dǎo)大鼠下丘腦GnRH、CRH、ERα和ERβmRNA水平。
　　結(jié)論：
　　去勢手術(shù)和醋酸潑尼松誘導(dǎo)大鼠骨質(zhì)疏松可以很好的模擬人類典型的骨質(zhì)疏松癥狀。給予葛根總黃酮12周的治療后,其可提高去勢手術(shù)和醋酸潑尼松誘導(dǎo)的大鼠的骨密度和骨生物力學(xué)性能等指標(biāo)對骨質(zhì)疏松有一定的保護(hù)和治療作用,其保護(hù)治療的機(jī)制可能與減少骨吸收