1、研究目的：觀察苦參堿（Matrine）對人宮頸癌Hela、Siha細胞的增殖抑制作用以及對JAK-STAT（Janus Kinase/Signal Transducers and Actiators of Transcription）信號傳導通路的影響，探討苦參堿是否通過增加SHP2、SOCS3、PIAS1的表達負性調(diào)控JAK-STAT信號傳導通路活性，從而發(fā)揮抑癌效應，這為臨床宮頸癌的抗癌藥物研制和應用開拓了新方向。
　　研究方

2、法：1、培養(yǎng)人宮頸腺癌Hela細胞株、人宮頸鱗癌Siha細胞株。2、采用噻唑藍比色法（MTT）檢測不同濃度苦參堿（0.25mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml、2.0mg/ml、4.0mg/ml）對宮頸癌Hela、Siha細胞作用時間24h、48h、72h后細胞的增殖情況，以不加藥細胞作為對照組，不加細胞僅加培養(yǎng)基為空白對照組，最終選取一個最適時間點和三個最適藥物濃度水平用于后續(xù)試驗。3、RT-qPCR檢測在不同濃度苦參堿干預

3、宮頸癌Hela、Siha細胞48h后，細胞中SHP2、SOCS3及PIAS1的mRNA的表達情況。4、Western blottling印跡法檢測在不同苦參堿濃度干預48h后，宮頸癌Hela、Siha細胞中SHP2、SOCS3及PIAS1蛋白的表達水平情況。
　　研究結(jié)果：
　　1、不同濃度苦參堿均能抑制宮頸癌Hela、Siha細胞的增殖，呈劑量依賴性和時間依賴性。濃度相同時，隨著苦參堿作用時間的增加，Hela、Siha細胞

4、的增殖抑制率明顯升高（P<0.05）；同一作用時間，隨著苦參堿濃度的增加，Hela、Siha細胞的增殖抑制率也明顯升高（P<0.05），其中以苦參堿濃度4.0mg/ml、作用時間72h的細胞增殖抑制率最高，宮頸癌Hela、Siha細胞的增殖抑制率分別為（75.07?2.32）％、（70.88?3.27）%，各濃度和時間之間比較具有顯著性差異（P<0.01）。選擇三個最適藥物濃度(0.5 mg/ml、1.0 mg/ml、2.0 mg/ml

5、)以及一個最適作用時間48h，作為后續(xù)Western blottling和RT-qPCR的實驗條件。
　　2、RT-qPCR結(jié)果顯示：與正常對照組相比，實驗組不同濃度苦參堿（0.5 mg/ml、1.0 mg/ml、2.0 mg/ml）作用宮頸癌Hela、Siha細胞48h后胞內(nèi)的SHP2、SOCS3mRNA表達量均上調(diào)，且SHP2、SOCS3的mRNA上調(diào)量隨苦參堿藥物濃度升高而增多，具有濃度依賴性，各組mRNA表達量與對照組相比

6、差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；實驗各組間相比差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　3、Western blotting結(jié)果顯示：與正常對照組相比，實驗組不同濃度苦參堿（0.5 mg/ml、1.0 mg/ml、2.0 mg/ml）作用宮頸癌Hela、Siha細胞48h后細胞內(nèi)的SHP2、SOCS3蛋白表達水平增加，且SHP2、SOCS3的蛋白表達量隨苦參堿藥物濃度升高而增多，具有濃度依賴性。實驗各組蛋白表達量與對照組相比差異

7、具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；實驗各組間蛋白表達量相比差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　4、與正常對照組相比，實驗組不同濃度苦參堿干預宮頸癌Hela、Siha細胞48h后，兩種細胞內(nèi)的PIAS1的蛋白及mRNA表達量均無明顯改變，各組蛋白表達量與對照組相比差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；實驗各組間相比差異亦無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、苦參堿對宮頸癌細胞Hela、Siha的增殖有明顯的抑