1、目的：
　　觀察高原低壓缺氧環(huán)境對大鼠海馬齒狀回神經(jīng)發(fā)生的影響,探索低氧腦損傷后神經(jīng)發(fā)生和神經(jīng)功能修復的機制,為臨床治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷類疾病提供實驗依據(jù)。
　　方法：
　　120只健康成年雄性SD大鼠,隨機分為兩組：模擬海拔5000米組、氣壓52.9千帕（實驗組）和海拔2200米組、氣壓77.406千帕（對照組）。實驗組經(jīng)模擬海拔5000米低壓氧艙處理3天，低壓缺氧3天后進入修復期，轉移至海拔2200米環(huán)境下飼養(yǎng)，對

2、照組不經(jīng)模擬海拔5000米低壓氧艙預處理，直接在海拔2200米環(huán)境飼養(yǎng)。兩組又分為缺氧損傷后低海拔環(huán)境修復1、3、7、14、28天五個亞組，每組12只。在相應時間點行腦組織取材。分別采用H-E染色、Nissl染色觀察腦組織形態(tài)學的變化；采用BrdU標記，免疫組化染色檢測BrdU陽性細胞表達，觀察神經(jīng)干細胞增殖能力變化；免疫熒光雙標檢測BrdU和DCX、GFAP的共表達，觀察神經(jīng)干細胞的分化能力；采用免疫組化染色檢測鈣結合蛋白家族S100

3、B(S100蛋白家族B)、S100A4(S100蛋白家族A4)陽性表達細胞的分布和數(shù)量變化；并采用qRT-PCR檢測S100B、S100A4基因表達情況。
　　結果：
　?。?）H-E染色結果顯示，對照組相比較，實驗組在缺氧損傷后1天至3天，海馬顆粒細胞損傷明顯，出現(xiàn)形態(tài)不規(guī)則的異性細胞或呈空泡狀的細胞，并出現(xiàn)核濃縮的凋亡細胞。Nissl染色結果顯示，與對照組相比較，1天、3天及7天實驗組大鼠海馬區(qū)變性/壞死細胞明顯增多（p

4、<0.05），神經(jīng)細胞數(shù)量減少、細胞排列較紊亂，可觀察到深染的變性細胞。
　?。?）BrdU免疫組化染色結果：實驗組BrdU陽性細胞數(shù)在低壓缺氧損傷后第7、14、28天明顯高于對照組對應時間點（p<0.05）。
　?。?）BrdU/DCX和BrdU/GFAP免疫熒光雙標結果：高海拔環(huán)境中，低氧損傷后海馬齒狀回存在DCX和GFAP陽性細胞表達。
　?。?）S100B免疫組化染色結果：實驗組S100B蛋白的表達在低壓缺氧損

5、傷后第1、3天明顯高于對照組對應時間點（p<0.05），其他時間點S100B蛋白表達量無統(tǒng)計學差異，S100B蛋白的表達和海馬形態(tài)組織結構損傷的程度基本相一致。
　?。?）S100A4免疫組化染色結果：實驗組S100A4蛋白的表達在低壓缺氧損傷后第3、7、14天明顯高于對照組對應時間點（p<0.05），28天組蛋白表達量無統(tǒng)計學差異，和神經(jīng)干細胞增殖的時間點基本一致;
　?。?）qRT-PCR檢測S100B、S100A4基因

6、表達，結果顯示，實驗組S100A4基因在低氧損傷后3天、7天、14天組表達明顯高于對照祖（p<0.05）；實驗組S100B基因在低氧損傷后1天、3天組表達明顯高于對照組（p<0.05）。
　　結論：
　　1、高海拔低壓缺氧刺激,激活大鼠海馬齒狀回顆粒細胞下層的神經(jīng)干細胞增殖。
　　2、低壓缺氧腦損傷后大鼠海馬齒狀回增殖的神經(jīng)干細胞可以分化為神經(jīng)元或神經(jīng)膠質細胞。
　　3、高海拔低壓缺氧刺激可誘導鈣結蛋白S100B