1、研究目的:
　　本課題研究在常染色體顯性多囊腎病(Autosomal Dominant Polycystic KidneyDisease，ADPKD)的微環(huán)境中，囊腫襯里上皮細(xì)胞趨化巨噬細(xì)胞募集至囊腫周圍并使其發(fā)生表型轉(zhuǎn)化的機制，并進(jìn)一步探討巨噬細(xì)胞刺激囊腫襯里上皮細(xì)胞增殖的機制，兩者相互影響，進(jìn)而促進(jìn)多囊腎病的疾病進(jìn)展。
　　實驗方法:
　　1.在Pkd1誘導(dǎo)敲除小鼠腎臟組織中，觀察病程的進(jìn)展與腎組織中乳酸濃度的關(guān)系

2、。
　　2.在Pkd1誘導(dǎo)敲除小鼠腎臟組織中，觀察腎組織中乳酸水平和囊腫指數(shù)的相關(guān)性。
　　3.收集OX161和UCL93細(xì)胞的條件培養(yǎng)液，檢測條件培養(yǎng)液中乳酸含量，酶聯(lián)免疫吸附法檢測兩種細(xì)胞的條件培養(yǎng)液中MCP-1的濃度變化。
　　4.予以乳酸刺激RAW264.7細(xì)胞，用RT-PCR法、蛋白免疫印跡法和細(xì)胞免疫熒光法分別從基因、蛋白等水平檢測RAW264.7細(xì)胞中ARG1的表達(dá)量。
　　5.予以乳酸刺激RAW2

3、64.7細(xì)胞，收集RAW264.7條件培養(yǎng)液，用酶聯(lián)免疫吸附法檢測條件培養(yǎng)液中ARG1的濃度變化。
　　6.予以乳酸刺激RAW264.7細(xì)胞，收集RAW264.7細(xì)胞，用ARG1活性檢測法檢測RAW264.7細(xì)胞內(nèi)ARG1的活性變化。
　　7.建立穩(wěn)定的二維共培養(yǎng)體系:即OX161/UCL93+RAW264.7細(xì)胞Transwell共培養(yǎng)，并在該體系中加入ARG1競爭性抑制劑—Nor-NOHA，用EdU法檢測增殖期的陽性細(xì)胞

4、核數(shù)目，計算處于增殖期細(xì)胞的百分比;流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期所占百分比。
　　8.在OX161細(xì)胞培養(yǎng)液中加入重組的人ARG1細(xì)胞因子和ARG1競爭性抑制劑—Nor-NOHA，用EdU法檢測增殖期的陽性細(xì)胞核數(shù)目，計算處于增殖期細(xì)胞的百分比;流式細(xì)胞術(shù)法檢測細(xì)胞周期所占百分比，用蛋白免疫印跡法檢測細(xì)胞增值通路蛋白的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:
　　1.Pkd1誘導(dǎo)敲除小鼠，隨多囊腎疾病進(jìn)展，腎臟囊腫指數(shù)增大，腎組織中乳酸濃度增

5、高。
　　2.囊腫襯里上皮細(xì)胞分泌趨化因子MCP-1，募集巨噬細(xì)胞至囊腫周圍;同時產(chǎn)生乳酸，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化為M2表型，表達(dá)并分泌有活性的ARG1。
　　3.ARG1能夠刺激囊腫襯里上皮細(xì)胞增殖，進(jìn)而促進(jìn)囊腫的增大和多囊腎病疾病進(jìn)展。
　　結(jié)論:
　　多囊腎病疾病進(jìn)程中，囊腫襯里上皮細(xì)胞分泌趨化因子MCP-1募集巨噬細(xì)胞分布在囊腫周圍。隨著囊腫進(jìn)行性增大，腎組織缺氧加重，乳酸濃度增加，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M2型分化，表