兩種海蟶多糖的提取、分離和結(jié)構(gòu)分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、我國具有豐富的海洋貝類資源,貝類多糖是海洋貝類體內(nèi)重要的生物活性物質(zhì)。因海洋貝類生存于特殊的海水環(huán)境中,貝類多糖具有獨特而復(fù)雜的結(jié)構(gòu),并在抗腫瘤、抗病毒和增強免疫等方面具有良好的應(yīng)用前景,有關(guān)貝類多糖結(jié)構(gòu)和生物活性的研究受到了國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注??O蟶和細長竹蟶均屬海洋軟體動物門,雙殼綱,竹蟶屬,不僅含有蛋白質(zhì)、糖類、及鈣、鐵和多種維生素,具有很高的營養(yǎng)價值;而且具有清熱解毒、補陰除煩、治痢、通乳、消炎、明目等活性,具有潛在的藥用價值。

2、本文以采自青島紅島海域的縊蟶和細長竹蟶為原料,采取不同的提取和分離純化方法,得到了4種縊蟶多糖組分和8種細長竹蟶多糖組分;對多糖組分的基本理化性質(zhì)進行了分析,并對部分多糖組分的結(jié)構(gòu)和抗乙肝病毒、免疫活性進行了研究。主要研究結(jié)果如下:
  1.對縊蟶依次采用沸水和0.1 mol/L氫氧化鈉溶液提取,得到了2種粗多糖組分(YC-S和YC-J),得率分別為7.2%和8.9%。對2種縊蟶粗多糖的理化性質(zhì)進行分析,結(jié)果表明:YC-S的總糖含

3、量和蛋白含量分別為55.4%和29.5%;YC-J的總糖含量和蛋白含量分別為38.1%和25.8%;兩者的單糖組成較簡單,均只含有葡萄糖(Glc),且不含硫酸根。YC-S和YC-J經(jīng)Q Sepharose Fast Flow(QFF)強陰離子交換柱層析,共獲得4種水溶性多糖組分(YC-S1、YC-S2、YC-J1和YC-J2)。對其中含量較多的YC-S2組分,進一步采用Sephacryl S-300凝膠滲透色譜柱進行純化,得到的YC-S

4、2純化組分的總糖含量和蛋白含量分別為90.9%和8.7%;采用高效凝膠滲透色譜(HPGPC)法測得其重均相對分子質(zhì)量為482 kD,且為單一對稱峰,純度較高。采用紅外光譜、核磁共振波譜、甲基化和氣質(zhì)聯(lián)用等技術(shù),推測了YC-S2純化組分的結(jié)構(gòu):以α-(1→4)Glc為主鏈,含有少量β-(1→3,4)和β-(1→4)分支的D-吡喃型葡聚糖。
  2.對細長竹蟶依次采用沸水提取和堿提取2種方法,分別得到了2種粗多糖組分(ZC-S和ZC-

5、J),得率分別為12.9%和3.5%。進一步采用陰離子交換分離純化,共得到8種水溶性多糖組分。基本理化性質(zhì)分析結(jié)果表明:ZC-S的總糖含量和蛋白含量分別為14.2%和59.3%; ZC-J的總糖含量和蛋白含量分別為12.5%和76.3%。ZC-S和ZC-J均為雜多糖,ZC-S單糖組成為Glc∶ GlcN∶ Gal∶GalN∶Fuc∶ Man=16.1∶2.9∶2.1∶1.9∶1.7∶1;ZC-J的單糖組成為Glc∶GlcN∶Gal∶Ma

6、n∶GlcN∶Fuc=9.1∶2.1∶1.5∶1.1∶1.1∶1。對于這2種單糖組成復(fù)雜的多糖,本文采用了多級酸水解的策略對其主鏈和支鏈結(jié)構(gòu)進行了分析,采用低濃度的三氟乙酸(TFA)將側(cè)鏈進行水解分析表明,ZC-S和ZC-J的側(cè)鏈分別含有巖藻糖、半乳糖醛酸和鼠李糖,除此之外,ZC-J的側(cè)鏈還含有少量的葡萄糖醛酸和木糖;主鏈部分經(jīng)甲基化和氣質(zhì)聯(lián)用可知:ZC-S主鏈含有→4)Glc(1→,→3,4)Man(1→,→2,4)Glc(1→和→4

7、,6)Gal(1→共4種連接方式;ZC-J主鏈含有→4)Glc(1→,→3,4)Man(1→和→4,6)Gal(1→共3種連接方式。
  3.對分離純化獲得的部分多糖組分進行了初步的免疫活性和抗乙肝病毒活性評價。實驗結(jié)果表明,細長竹蟶多糖組分中低劑量(50μg/mL)的ZC-S2、中劑量(100μg/mL)的ZC-S3~ZC-S4及中、高劑量(200μg/mL)的ZC-J2~ZC-J4,均可顯著增強Raw264.7細胞的吞噬指數(shù),

8、表明細長竹蟶多糖具有顯著增強小鼠免疫活性的作用;但縊蟶YC-S2多糖組分免疫活性較弱。細長竹蟶多糖組分ZC-S2和ZC-S3具有較好的抗乙肝病毒活性,當(dāng)ZC-S3濃度為200μg/mL時,其對HBeAg和HBsAg的抑制率分別為38%和35%。
  關(guān)于縊蟶及細長竹蟶多糖的研究,目前報道的主要是有關(guān)其提起方法和生物活性方面的研究,未見有關(guān)其分離純化、結(jié)構(gòu)分析方面的系統(tǒng)研究和免疫活性、抗乙肝病毒活性方面的報道。本文相關(guān)的研究結(jié)果對縊

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