1、目的:1、觀察廣西醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院2013年12月～2014年4月檢驗科細菌實驗室從住院患者各類標本中分離培養(yǎng)出的銅綠假單胞菌菌株的來源分布及耐藥情況。2、了解該院銅綠假單胞菌菌株之間的親緣關系。3、對比銅綠假單胞菌的隨機擴增多態(tài)性DNA（Random amplifiedpolymorphic DNA，RAPD）指紋圖譜，判斷是否存在局部爆發(fā)流行。4、了解銅綠假單胞菌在長期持續(xù)感染過程中的RAPD指紋圖譜變化情況。
　　方法:

2、1、收集廣西醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院2013年12月～2014年4月檢驗科細菌實驗室從本院住院患者痰液、肺泡灌洗液、血液、尿液、創(chuàng)面分泌物等各類標本中分離培養(yǎng)出的銅綠假單胞菌菌株及其相關信息。用VITEK-2全自動細菌鑒定/藥敏分型儀或ATB expression半自動細菌鑒定儀對分離培養(yǎng)出的銅綠假單胞菌菌株進行培養(yǎng)鑒定和藥敏分析。細菌培養(yǎng)鑒定和藥敏實驗遵照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》的要求進行，同時參照美國臨床和實驗室標準協(xié)會（Clinica

3、l and Laboratory Standards Institute，CLSI）2012年制定的標準。分析非重復銅綠假單胞菌的流行病學特征及其藥敏情況。2、選擇感染銅綠假單胞菌時間大于30天的患者，從他們的痰液、肺泡灌洗液、血液、尿液等標本中分離的銅綠假單胞菌菌株作為本實驗的實驗菌株。用煮沸法提取細菌基因組DNA，采用RAPD基因分型技術獲得RAPD指紋圖譜，并進行同源性聚類分析，通過相似性系數(shù)了解該院銅綠假單胞菌菌株之間的親緣關系

4、;對比銅綠假單胞菌的RAPD指紋圖譜，判斷銅綠假單胞菌局部爆發(fā)流行的存在，以及長期持續(xù)感染銅綠假單胞菌的過程中，其指紋圖譜是否會發(fā)生改變。
　　結(jié)果:1、共收集銅綠假單胞菌293株。其中剔除同一患者同一部位重復分離菌株后的非重復銅綠假單胞菌為175株。從標本來源來看，非重復銅綠假單胞菌主要分離于患者的呼吸道標本痰及肺泡灌洗液，占52％(91/175)，其余依次為創(chuàng)面分泌物占18.9％(33/175)、尿液占6.9％(12/175)

5、、血液占6.3％(11/175)、腹腔引流液占5.7％(10/175)，其余標本來自留置導管、咽拭子、組織標本等。從科室分布來看，非重復銅綠假單胞菌主要分離于來自重癥監(jiān)護病房的患者，占25.7％(45/175)，其次為燒傷整形外科17.7％(31/175)、中醫(yī)科占13.1％(23/175)、呼吸內(nèi)科占8.6％(15/175)和兒科5.1％(9/175)，其余標本來自其他臨床科室。分析其藥敏情況，發(fā)現(xiàn)非重復銅綠假單胞菌對氨曲南、環(huán)丙沙星

6、、左氧氟沙星、妥布霉素及慶大霉素的耐藥率較高，均＞30％。2、在收集的293株銅綠假單胞菌中，有117株來自感染銅綠假單胞菌持續(xù)時間大于30天的患者;這117株銅綠假單胞菌共擴增出19種不同的基因型條帶，分別為A～S型，分型率100％。重癥監(jiān)護病房及燒傷整形外科各發(fā)生一起在不同患者之間檢出相同RAPD型別銅綠假單胞菌菌株的情況，其余患者RAPD型別各不相同。有4例長期持續(xù)感染銅綠假單胞菌的患者，從其痰液、肺泡灌洗液、創(chuàng)面分泌物、血液、尿

7、液等標本中分離培養(yǎng)出的銅綠假單胞菌RAPD指紋圖譜發(fā)生改變，其余19例患者痰液、肺泡灌洗液等送檢標本中分離出的銅綠假單胞菌RAPD指紋圖譜未發(fā)生改變。
　　結(jié)論:1、銅綠假單胞菌感染主要發(fā)生在重癥監(jiān)護病房、燒傷整形外科和中醫(yī)科;它們對多種抗生素呈不同程度耐藥，其中對氨曲南、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、妥布霉素及慶大霉素的耐藥率均＞30％，而對多粘菌素B的耐藥率為0，敏感率100％。
　　2.銅綠假單胞菌存在基因多態(tài)性，部分型別之間