1、背景
　　食管癌作為世界上第八大常見的惡性腫瘤，死亡率占世界第六位。在亞洲，食管鱗癌作為最主要的組織學類型，其5年生存率＜30％。目前主要以化療，放療，手術，靶向療法來治療食管鱗癌，但許多食管鱗癌病人仍出現(xiàn)疾病的復發(fā)、進展和較差的預后。越來越多的證據(jù)證實腫瘤干細胞會導致腫瘤的發(fā)生、進展、治療耐藥和遠距離轉移。腫瘤干細胞被認為是腫瘤組織中具有自我更新增殖、多向分化的潛能以及可導致腫瘤形成進展的生物學特性的一小部分未分化細胞。大量證據(jù)

2、證實富集和維持腫瘤干細胞特性可以通過低粘附無血清懸浮培養(yǎng)形成成球細胞實驗、流式細胞分選術分離腫瘤干細胞實驗、腫瘤干細胞特異性表面標記物來獲得。
　　Lgr5作為一種G蛋白偶聯(lián)受體，是Wnt信號通路的靶向調(diào)節(jié)基因。Lgr5由17個富含亮氨酸的重復單位和7個跨膜區(qū)域組成，具有GPCRs家族的典型特征。Barker等學者發(fā)現(xiàn)Lgr5表達于小腸和結腸的隱窩底部，經(jīng)過單一分選的Lgr5表達陽性的隱窩底柱狀細胞可以形成隱窩絨毛類器官。因此證實

3、Lgr5可被認為是小腸干細胞和結腸干細胞的特異性標記物。近年來研究發(fā)現(xiàn)Lgr5在多種腫瘤中呈高表達，如結腸癌、肝癌、卵巢癌、腦膠質瘤、基底細胞癌和胃癌等。Wnt/β-catenin信號通路在正常干細胞以及腫瘤干細胞中均起著至關重要的作用，同時被異常激活的Wnt/β-catenin通路與食管鱗癌等腫瘤的發(fā)生密切相關。
　　目的
　　1.探討分析干性基因Lgr5在食管鱗癌組織、食管鱗癌細胞和具有干性較強的食管鱗癌成球細胞中的表達

4、及臨床意義；
　　2.通過腫瘤干細胞相關基因在食管鱗癌成球細胞中的過高表達和較高的裸鼠體內(nèi)成瘤能力證實食管鱗癌成球細胞具備較高的干細胞特性；
　　3.采用siRNA使Lgr5的表達降低，分析食管鱗癌細胞的增殖、遷移、侵襲能力、干細胞基因表達以及Wnt/β-catenin信號通路相關分子表達能力的變化。
　　方法
　　采用免疫組織化學法(IHC)檢測280例食管鱗癌組織和150例癌旁組織中Lgr5的蛋白表達水平；K

5、aplan-Meier分析法分析食管鱗癌患者的生存預后；低黏附懸浮培養(yǎng)法培養(yǎng)食管鱗癌細胞系 KYSE450形成成球細胞；Quantitative real-time PCR(qRT-PCR)、Western Blot法檢測干性相關基因以及Lgr5在親代細胞和成球細胞中的表達差異；BALB/c裸鼠體內(nèi)注射親代細胞和成球細胞檢測成球細胞干性；應用Lgr5 siRNA瞬時轉染KYSE450細胞系后，CCK8檢測細胞增殖、Transwell實驗

6、檢測細胞的遷移和侵襲能力，qRT-PCR、Western Blot法檢測干性相關基因和Wnt/β-catenin信號通路相關分子的表達水平變化。
　　結果
　　1.Lgr5在食管鱗癌組織中的表達水平明顯高于癌旁正常食管組織；且與淋巴結轉移、浸潤深度、腫塊大小、分化程度、腫瘤分期和較差的預后密切相關；
　　2.在食管鱗癌成球細胞中Lgr5和腫瘤干細胞相關基因均呈高表達水平；
　　3.體內(nèi)實驗證實成球細胞具有較高的致

7、瘤能力；
　　4.沉默Lgr5的表達可以抑制食管鱗癌細胞的增殖、遷移、侵襲能力；
　　5.沉默 Lgr5的表達可以降低腫瘤干細胞相關基因 SOX2、ALDH1A1、NANOG的表達；
　　6.沉默Lgr5的表達可以降低β-catenin及其Wnt/β-catenin信號通路重要的分子cyclinD1、c-Myc的表達。
　　結論
　　Lgr5可能是食管鱗癌發(fā)生、復發(fā)、進展、侵襲轉移的標志之一，Lgr5呈高表