1、第一部分、安腸湯對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸黏膜組織代謝組學變化的影響
　　背景與目的:潰瘍性結(jié)腸炎(UC)是一種慢性炎癥性腸病，近年來探究其發(fā)病機制及尋找有效防治藥物，進展仍然有限。安腸湯是臨床應(yīng)用和研究20余年治療UC的中藥復(fù)方，臨床療效肯定。安腸湯與UC的相關(guān)研究已有一定研究基礎(chǔ)，但安腸湯治療UC的作用機制仍未明確。代謝組學及腸道微生態(tài)是近年最為關(guān)注的研究熱點，但兩者結(jié)合在UC中的研究報道甚少。本研究采用代謝組學來探索安腸湯治療U

2、C的作用機制。
　　方法:
　　1.采用2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)造模，TNBS劑量90mg/kg，建立UC大鼠模型。
　　2.選擇最佳方案造模，隨機分為模型組，麗珠腸樂組、美沙拉嗪組（陽性藥物對照組），安腸湯低、中、高劑量組（治療組）。
　　3.各組分別在治療后第5、10、15天各處死1/3存活大鼠，實驗期間觀察大鼠一般情況及糞便情況，進行疾病活動指數(shù)（disease activity index，D

3、AI）評分;取大鼠黏膜組織進行病理分析，以結(jié)腸損傷指數(shù)(colon macroscopic damageindex，CMDI)評判大鼠黏膜損傷情況，Geboes指數(shù)評價結(jié)腸黏膜組織病理學情況;取病變結(jié)腸黏膜組織進行氣象色譜-質(zhì)譜檢測(GC-MS)，并采用主成分分析法、正交偏最小二乘法-判別分析(OPLS-DA)，最后采用0PLS-DA模型第一主成分的VIP值（閾值＞1），并結(jié)合t檢驗的P值（P＜0.05)來尋找差異性代謝物。
　　

4、結(jié)果:
　　1.UC大鼠模型在疾病癥狀、結(jié)腸損傷和病理表現(xiàn)上均與UC疾病表現(xiàn)基本一致，造模后10天模型表現(xiàn)最佳。
　　2.檢測到的色譜圖與質(zhì)譜庫進行匹配鑒定，得到準確定性的代謝化合物47個，安腸湯治療組與陽性藥物對照組均對UC大鼠均有治療作用。
　　3.經(jīng)差異物篩選鑒定，最終得到UC大鼠病變結(jié)腸黏膜潛在代謝標志物10個，分別為腺嘌呤、胞嘧啶、尿苷、甘氨酸、葡萄糖、木糖、β-丙氨酸、甘露糖、乳酸、肌氨酸。
　　4.

5、安腸湯可降低腺嘌呤、胞嘧啶、尿苷、乳酸、甘氨酸和葡萄糖含量，提升甘露糖、木糖、肌氨酸和β-丙氨酸含量，回調(diào)幅度較陽性藥物組明顯(P＜0.05)，其中安腸湯中劑量組的回調(diào)幅度最佳。
　　結(jié)論:
　　1.采用2，4，6-三硝基苯磺酸液建立UC大鼠模型可行，安腸湯和美沙拉嗪、麗珠腸樂對UC大鼠均具有治療或緩解作用。
　　2.UC大鼠結(jié)腸黏膜組織中存在10種內(nèi)源性差異性代謝物:腺嘌呤、甘氨酸、胞嘧啶、尿苷、甘露糖、乳酸、β-丙

6、氨酸、葡萄糖、肌氨酸和木糖，它們有可能作為診斷UC的潛在分子代謝標志物。
　　3.安腸湯可能是通過降低腺嘌呤、胞嘧啶、尿苷、乳酸、甘氨酸和葡萄糖含量，提升甘露糖、木糖、肌氨酸和β-丙氨酸含量來調(diào)節(jié)腸道內(nèi)微生態(tài)。
　　4.安腸湯治療組對UC大鼠10種內(nèi)源性差異性代謝物調(diào)節(jié)作用相對優(yōu)于陽性藥物組。
　　第二部分、安腸湯對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠腸道菌群變化的影響
　　背景與目的:近年來認為UC的發(fā)病機制與遺傳、免疫、腸道微生

7、態(tài)等因素可能有著密切關(guān)聯(lián)。腸道菌群、乙酸、內(nèi)毒素均是腸道微生態(tài)的重要組成部分，腸道微生態(tài)的穩(wěn)定對于維持正常腸道功能至關(guān)重要，而腸道微生態(tài)失衡可能是UC的發(fā)病機制之一。本研究通過對比UC大鼠腸道菌群及乙酸、內(nèi)毒素變化，探索UC大鼠的腸道微生態(tài)特征及安腸湯干預(yù)機制。
　　方法:
　　1.按照試驗一采用2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)造模法進行造模并分組，造模后第10天開始灌胃，灌胃7天后處死大鼠并取材。
　　2.取病變

8、部位結(jié)腸內(nèi)容物提取糞便細菌基因組DNA，采用SYBRGreen熒光染料法對提取物進行各菌屬實時熒光定量PCR檢測，各組菌屬含量采用Delta-delta Ct相對定量法定量并制作柱狀圖直觀分析;以液相色譜法檢測乙酸含量;鱟試劑法檢測大鼠腸道內(nèi)毒素含量。
　　結(jié)果:
　　1.UC模型組大鼠腸道菌群變化:與正常對照組相比，UC模型組在乳酸桿菌、雙歧桿菌、梭菌屬、脆弱擬桿菌屬、單形擬桿菌、多形擬桿菌、卵形擬桿菌、普通擬桿菌中表達含

9、量明顯降低（p＜0.05），在擬桿菌屬、梭桿菌屬、肉毒桿菌、艱難桿菌、吉氏擬桿菌、糞腸球菌、屎腸球菌、大腸桿菌中則表達含量明顯升高（p＜0.05）。
　　2.美沙拉嗪組和麗珠腸樂組大鼠腸道菌群變化:與UC模型組相比，美沙拉嗪組和麗珠腸樂組在乳酸桿菌、雙歧桿菌、梭菌屬、脆弱擬桿菌屬、多形擬桿菌、卵形擬桿菌、普通擬桿菌中表達含量明顯升高(p＜0.05);在單形擬桿菌中，美沙拉嗪組較UC模型組表達含量升高無明顯差異(p＞0.05)，而麗

10、珠腸樂組較UC模型組表達含量明顯升高(p＜0.05);在梭桿菌屬、肉毒桿菌、艱難桿菌、吉氏擬桿菌、糞腸球菌、屎腸球菌、大腸桿菌中美沙拉嗪組與麗珠腸樂組相對表達含量較UC模型組明顯降低(p＜0.05);在擬桿菌屬中，美沙拉嗪組較UC模型組降低無差異(p＞0.05)，而麗珠腸樂組較UC模型組明顯降低(p＜0.05)。
　　3.安腸湯各組大鼠腸道菌群變化:與UC模型組相比，安腸湯各組在乳酸桿菌、雙歧桿菌、梭菌屬、脆弱擬桿菌屬、多形擬桿菌

11、、卵形擬桿菌、普通擬桿菌中表達含量明顯升高（p＜0.05）;在梭桿菌屬、肉毒桿菌、艱難桿菌、吉氏擬桿菌、糞腸球菌、屎腸球菌、大腸桿菌中表達含量明顯降低(p＜0.05);在單形擬桿菌中，安腸湯低劑量組較UC模型組升高無明顯差異(p＞0.05)，而中劑量組和高劑量組較UC模型組明顯升高(p＜0.05)。
　　4.安腸湯各組組間大鼠腸道菌群變化:安腸湯中劑量組在乳酸桿菌、雙歧桿菌、梭桿菌屬、脆弱擬桿菌、單形擬桿菌、多形擬桿菌、肉毒桿菌、

12、普通擬桿菌、艱難桿菌、糞腸球菌、屎腸球菌、大腸桿菌較其他兩組更明顯接近空白對照組（p＜0.05），而高劑量組在擬桿菌屬、梭菌屬、卵形桿菌、吉氏擬桿菌則較其他兩組更明顯接近空白對照組(p＜0.05）。
　　5.安腸湯中劑量組與美沙拉嗪組、麗珠腸樂組腸道菌群變化對比:安腸湯中劑量組的表達含量在乳酸桿菌、脆弱擬桿菌、吉氏擬桿菌中較麗珠腸樂組更明顯接近空白對照組(p＜0.05），在雙歧桿菌、梭菌屬、單形擬桿菌、肉毒桿菌中較美沙拉嗪組更明顯

13、接近空白對照組（p＜0.05），在大腸桿菌、屎腸球菌、糞腸球菌、艱難桿菌、普通擬桿菌、卵形桿菌、多形擬桿菌和擬桿菌屬中的相對表達含量較美沙拉嗪組和麗珠腸樂組均更明顯接近空白對照組（p＜0.05）。
　　6.乙酸和內(nèi)毒素變化:模型組明顯高于空白對照組和各治療組(p＜0.05)，但各治療組間比較均無明顯差別(p＞0.05)
　　結(jié)論:
　　1.UC大鼠腸道菌群變化具有明顯差異性和特征性，雙歧桿菌、乳酸桿菌、脆弱擬桿菌屬、梭

14、菌屬、卵形擬桿菌、多形擬桿菌、單形擬桿菌、普通擬桿菌中相對表達含量降低;艱難桿菌、擬桿菌屬、肉毒桿菌、梭桿菌屬、糞腸球菌、吉氏擬桿菌、大腸桿菌、屎腸球菌中則相對表達含量升高，這種變化可能在UC的發(fā)病中可能起到重要作用。
　　2.安腸湯對UC大鼠總體腸道菌屬具有明顯的調(diào)節(jié)作用，在總體上與美沙拉嗪和麗珠腸樂具有一致性，調(diào)控幅度相對優(yōu)于美沙拉嗪組及麗珠腸樂組，安腸湯對UC腸道菌群的調(diào)控作用可能是其治療UC的作用機制。
　　3.安腸