1、目的:
　　五味子是一種傳統(tǒng)中藥，來源于木蘭科的植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.) Baill.的干燥成熟果實，習稱為“北五味子”，而木蘭科華中五味子Schisandrasphenanthera Rehd.et Wils.的干燥成熟果實則稱為“南五味子”。五味子中含有不少的多糖成分，多糖又稱為碳水化合物，其通用的分子式為(CH2O)n。五味子多糖大多具有抗氧化、抗衰老的作用，在體內可以保護人的腎臟、

2、肝臟。目前已有文獻中對五味子多糖抗氧化和衰老方面的研究并不深入，尤其是對其作用機制的研究更是少之又少，因此探究五味子多糖產生的抗氧化作用及其作用機制具有不小的意義。NF-E2(Nuclearfactor erythriod2-related factor2，Nrf2)目前已經被證明是與抗氧化作用最密切相關的靶標之一，當體內、外受到氧化應激等相關刺激后，Nrf2在細胞漿中與Keap1迅速地解離開來并被活化，接著Nrf2從核外向核內運動。本

3、實驗以人胚腎細胞293T為模型，研究北五味子多糖對293T細胞的抗氧化、增殖作用的影響以及作用機制，為氧化應激、衰老的預防和治療提供新的思路和方向，也為北五味子多糖開發(fā)出相關的食品、藥品提供理論依據。
　　方法:
　　1.細胞的培養(yǎng)
　　按照常規(guī)方法培養(yǎng)293T細胞株，培養(yǎng)液按如下比例配制:DMEM高糖培養(yǎng)基∶FBS∶青鏈霉素混合液=(45ml∶5ml∶500ul)，于恒溫37℃，恒量含5％CO2的細胞培養(yǎng)箱內每天觀察

4、細胞生長情況，傳代培養(yǎng)。
　　2.北五味子粗多糖(SCP)的提取、分離、純化
　　到藥店購買北五味子的藥材，經過石油醚脫脂后得到水提粗多糖，經過脫色、脫蛋白及過DEAE-52、sephadexG-100層析柱進行分離、純化得到一個純化的多糖組分，收集液凍干成粉末后在冷凍干燥的條件下保存。
　　3.北五味子多糖的抗氧化作用
　　根據SOD、CAT、MDA、GSH含量或活性檢測試劑盒的說明書操作
　　4.北五味

5、子多糖對Nrf2及其下游因子的調節(jié)作用
　　采用Western blot檢測不同濃度的純化后多糖組分作用于293T細胞后細胞內Nrf2及其下游的NQO1、HO-1的蛋白表達水平變化，用熒光酶標儀檢測不同濃度的多糖組分給藥后對ARE-luc熒光素酶的影響。
　　5.北五味子多糖對細胞核內外Nrf2活性及其穩(wěn)定性的影響
　　采用Western blot檢測不同濃度的多糖組分給藥后293T細胞Nrf2在核內外蛋白表達水平的變

6、化。用Western blot檢測多糖組分預處理細胞2h后給或不給蛋白合成抑制劑CHX對不同時間段細胞內Nrf2蛋白水平表達的影響。
　　6.北五味子多糖對Nrf2與DNA結合的活性的影響
　　多糖組分處理293T細胞后收集并裂解細胞，提起核蛋白，用EMSA法檢測Nrf2與DNA結合活性的變化。
　　7.北五味子多糖對細胞增殖的影響
　　以293T細胞為研究對象，10umol·L-1的叔丁基對苯二酚(tBHQ)作

7、為激動劑用于陽性對照組，實驗各組用不同濃度多糖組分作用于細胞，分別培養(yǎng)24，48，72 h后，MTT法檢測細胞增殖情況。
　　結果:
　　1.水提得到的粗多糖經過脫色、脫蛋白后總多糖含量為40％。以水為洗脫劑，依次經過DEAE-52層析柱分離純化得到多糖組分SCP-1、過sephadexG-100層析柱分離純化后得到純化組分SCP-2，總多糖含量為86％。
　　2.SCP-2能上調Nrf2及其下游抗氧化因子NQO1、H

8、O-1蛋白水平的表達，增強ARE熒光素酶的活性。
　　3.SCP-2能增強293T細胞中GSH、CAT的含量，減少MDA的含量，增加293T細胞中SOD的活力。
　　4.SCP-2能降低核外的Keap1、Nrf2蛋白水平的表達，使Nrf2活化并向細胞核內轉移，同時SCP-2還可以增加Nrf2的蛋白穩(wěn)定性，延長其半衰期。
　　5.SCP-2能增強Nrf2的DNA結合活性。
　　6.SCP-2可以促進正常細胞的增殖，

9、抑制癌細胞的增殖。
　　結論:
　　北五味子多糖(S CP)能通過激活Nrf2/ARE信號通路，上調Nrf2及其下游抗氧化因子比如二相代謝酶NQO1、H0-1的表達，增加GSH、CAT等內源性抗氧化酶的表達，還能減少細胞內MDA的含量，增強SOD的活力，對正常細胞有促進增殖的作用，對癌細胞則是抑制其增殖。這些作用產生的機制與北五味子多糖能誘導Nrf2從核外向核內轉移，增強Nrf2的蛋白穩(wěn)定性，延長其半衰期，并能增強Nrf2的