1、腸易激綜合征(irritable bowel syndrome，IBS)是消化內(nèi)科最常見的慢性復(fù)發(fā)性胃腸道疾病，以羅馬Ⅲ標準為診斷標準，IBS的全球發(fā)病率為1.1％到29.2％[1]。IBS的主要特征是腹痛、腹部不適，伴有排便習(xí)慣的改變。患者癥狀遷延起伏，生活質(zhì)量顯著下降，使得IBS成為一個重要的公共衛(wèi)生問題。它的發(fā)病機制不完全明確，有多個系統(tǒng)參與其中，比如腦-腸軸調(diào)節(jié)異常、腸道屏障功能障礙、內(nèi)臟高敏感性、腸道運動功能異常等，而心理應(yīng)激

2、、食物不耐受、腸道感染是重要的誘發(fā)因素[2]。
　　有部分IBS患者的癥狀是由焦慮、緊張、憤怒、恐懼等心理應(yīng)激（stress）所誘發(fā)[3]。應(yīng)激作為對機體內(nèi)部穩(wěn)態(tài)的一種威脅，能夠?qū)е履X-腸軸調(diào)節(jié)功能異常，進而引起一系列廣泛的胃腸道效應(yīng)，最終導(dǎo)致IBS的發(fā)生。應(yīng)激反應(yīng)中所釋放的促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子（corticotropin releasing factor，CRF）是重要的調(diào)節(jié)介質(zhì)，它是一種41氨基酸肽，可由中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周

3、組織產(chǎn)生。人體的胃腸道中普遍有CRF的表達，與中樞CRF的作用方式不同，腸道中神經(jīng)內(nèi)分泌細胞和免疫細胞釋放的外周CRF可直接激活免疫細胞，在局部發(fā)揮促炎作用或作用于內(nèi)臟神經(jīng)末梢[4]。CRF的活性是通過與效應(yīng)細胞上CRF受體CRF-R1或/和CRF-R2受的結(jié)合來介導(dǎo)的，它們是特殊的七次穿膜的G蛋白偶聯(lián)受體[5,6]，應(yīng)激反應(yīng)可以導(dǎo)致其在腸道的表達異常[7]。研究發(fā)現(xiàn)，IBS患者腸道組織中，有CRF上調(diào)的現(xiàn)象[8];而避水應(yīng)激、束縛應(yīng)激

4、均可導(dǎo)致小鼠出現(xiàn)腸道運動異常和內(nèi)臟高敏感性，結(jié)腸組織中也存在外周CRF升高的現(xiàn)象[9，10]。所以CRF是導(dǎo)致IBS的發(fā)生的關(guān)鍵效應(yīng)因子。
　　近年來，肥大細胞在IBS發(fā)病機制中的作用逐漸受到研究者們的關(guān)注[11]。在IBS患者的腸道的各部位均可以觀察到肥大細胞的增殖[12-15]。肥大細胞屬于腸道固有免疫系統(tǒng)，與腸道的主要功能關(guān)系密切，可以調(diào)節(jié)腸道屏障功能、上皮細胞的分泌功能、腸道的血供、神經(jīng)-免疫系統(tǒng)的相互作用、內(nèi)臟的敏感性以

5、及腸道的運動功能等[15]。若腸道中的肥大細胞發(fā)生增殖和活化，其釋放的各種細胞因子、趨化物質(zhì)和蛋白酶，可激活神經(jīng)-免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致內(nèi)臟高敏感性、腸道運動功能的異常、腸道屏障功能的異常以及內(nèi)分泌功能的異常，最終可能導(dǎo)致患者出現(xiàn)腹痛、腹脹、腹瀉或/和便秘等IBS的癥狀[17]。
　　腸道有大量的共生菌群(commensal microflora)，也稱為原籍菌，定植于腸上皮細胞的表面，一些細菌的成分比如脂多糖（lipopolysacch

6、aride，LPS）、肽聚糖、細菌產(chǎn)生的超抗原、細菌的CpG-DNA序列、熱休克蛋白等都有激活免疫細胞的作用[17]。為了維持免疫穩(wěn)態(tài)，生理狀態(tài)下，作為暴露于腸內(nèi)細菌的第一線，腸道上皮細胞及腸道免疫細胞對共生菌群均處于一種免疫耐受的狀態(tài)。其中，對LPS產(chǎn)生的耐受被稱為內(nèi)毒素耐受(endotoxin tolerance，ET)。在這個調(diào)控機制中，模式識別受體Toll樣受體(Toll-like receptors，TLRs)發(fā)揮了重要的作用

7、。其中，TLR4是LPS的受體，研究表明，結(jié)腸上皮細胞、腸道巨噬細胞的內(nèi)毒素耐受可能是通過下調(diào)TLR4的表達來實現(xiàn)的[18-20]。細胞因子信號抑制蛋白(suppressor of cytokine signaling，SOCS)家族在維持內(nèi)毒素耐受的過程中也發(fā)揮了重要的作用[21]。肥大細胞作為腦-腸軸的重要的效應(yīng)細胞在消化道黏膜廣泛分布，同時又處于與共生菌群接觸的第一線，其TLRs信號途徑經(jīng)過精心調(diào)控，維持著內(nèi)毒素耐受。那么，當(dāng)肥大

8、細胞的內(nèi)毒素耐受被打破，原本對LPS的低反應(yīng)狀態(tài)發(fā)生改變，必將激活下游的效應(yīng)系統(tǒng)，引起腸道免疫系統(tǒng)的激活，導(dǎo)致內(nèi)臟高反應(yīng)、腸道屏障功能障礙及腸道運動的異常。我們團隊的研究顯示，CRF可調(diào)控上皮細胞上TLR4的表達，從而打破其對LPS的耐受[22]。肥大細胞表達有CRF的受體CRF-R1和CRF-R2，同時還表達TLR4，那么CRF是否能夠打破肥大細胞細胞的內(nèi)毒素耐受是一個值得探討的問題。
　　腸道屏障主要由微生物屏障、粘液層、腸道

9、上皮細胞層、黏膜下層的淋巴細胞和固有免疫細胞等構(gòu)成，發(fā)揮著雙重的作用:一方面要從腸道的食物中吸收營養(yǎng);一方面要選擇性的控制腸腔內(nèi)的食物抗原、腸道原籍菌及其活性成分進入腸道固有免疫系統(tǒng)、產(chǎn)生免疫反應(yīng)。所以，腸道屏障功能在維持腸道正常生理功能和免疫穩(wěn)態(tài)中具有至關(guān)重要的作用。腸道屏障功能障礙是指腸黏膜的通透性發(fā)生持續(xù)的升高，導(dǎo)致腸道免疫穩(wěn)態(tài)失衡、功能受損和疾病發(fā)生[23]。許多IBS的患者中存在著腸黏膜通透性增高的情況，這可能會導(dǎo)致腸道內(nèi)共生

10、菌的某些成分和大分子食物抗原進入并激活腸道免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致各種活性物質(zhì)的釋放，患者出現(xiàn)IBS的癥狀[24,25]。雖然目前導(dǎo)致IBS患者腸道屏障功能障礙的機制并不明確，但很多研究者認為這種現(xiàn)象與腸道的低度炎癥有關(guān)，是由促炎因子的持續(xù)作用所導(dǎo)致，而腸道的低度炎癥又與活化的肥大細胞的數(shù)量呈正相關(guān)[26，27]。激活的肥大細胞所釋放的的肥大細胞蛋白酶(mast cell protease，MCP)類物質(zhì)和TNF-α能夠?qū)е履c黏膜通透性增高[28

11、]。但若肥大細胞對LPS的內(nèi)毒素耐受能夠被打破，LPS-TLR4途徑的細胞因子是否能夠影響腸道屏障功能尚需探討。
　　綜上所述，應(yīng)激反應(yīng)中釋放的CRF是IBS病理生理過程中最重要的效應(yīng)因子，肥大細胞是腸黏膜免疫系統(tǒng)中重要的固有免疫細胞，腸道屏障功能障礙是IBS發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。正常生理條件下，肥大細胞保持著對LPS的內(nèi)毒素耐受。那么，CRF是否能夠調(diào)控肥大細胞打破其對LPS的內(nèi)毒素耐受，進而引起腸道屏障功能障礙，通過什么機制導(dǎo)致腸道

12、屏障功能障礙，是本研究旨在探討的問題。希望通過本研究能夠進一步闡明IBS的發(fā)病機制，為IBS的治療尋找新的證據(jù)，探索新的前景。
　　第一部分 CRF調(diào)控肥大細胞打破內(nèi)毒素耐受的機制研究
　　目的:
　　肥大細胞表達有CRF的受體CRF-R1和CRF-R2，CRF可以通過與二者結(jié)合誘導(dǎo)肥大細胞脫顆粒，釋放出MCP和TNF-α。但CRF是否能夠通過調(diào)控肥大細胞表面的TLR4受體、以及SOCS系統(tǒng)來打破肥大細胞對LPS的內(nèi)毒

13、素耐受，最終合成釋放LPS-TLR4途徑的細胞因子（IL-1β、IL-6、IL-13和TNF-α），目前尚不明確。本研究在體外用LPS誘導(dǎo)HMC-1肥大細胞建立內(nèi)毒素耐受，再用CRF對內(nèi)毒素耐受的肥大細胞進行干預(yù)，了解CRF是否能夠調(diào)控肥大打破其對LPS的內(nèi)毒素耐受，并闡明其相關(guān)機制。
　　材料與方法:
　　1.用不同濃度的LPS(0、10、100ng/mL)預(yù)處理HMC-1肥大細胞，再以100ng/mL的LPS進行激發(fā)，透

14、射電鏡觀察各組細胞脫顆粒的情況，ELISA法檢測細胞培養(yǎng)液中TNF-α、MCP，IL-1β、IL-6以及IL-13的水平。
　　2.在成功誘導(dǎo)針對LPS內(nèi)毒素耐受的基礎(chǔ)上，用不同劑量的CRF(0，50，100 pg/mL)作用于耐受的肥大細胞，觀察其對肥大細胞表面TLR2、TLR4 mRNA和蛋白表達的影響。為了了解這種調(diào)控作用是通過CRF與CRF-R1或/和CRF-R2結(jié)合，在細胞內(nèi)是以Erk1/2還是以p38 MAPK信號途徑

15、轉(zhuǎn)導(dǎo)，分別以不同的拮抗劑在CRF干預(yù)前進行預(yù)處理。收集各組細胞，提取總mRNA和總蛋白，進行real-time PCR和Western blot的檢測。
　　3.為了解TLR4是否CRF打破肥大細胞內(nèi)毒素耐受的中心環(huán)節(jié)，設(shè)計合成shRNA，構(gòu)建慢病毒載體對HMC-1肥大細胞進行轉(zhuǎn)染，對HMC-1肥大細胞的TLR4基因進行基因沉默。
　　4.將按步驟2中處理的各組細胞及TLR4 null的細胞，予以100ng/mL的LPS激發(fā)

16、，透射電鏡觀察各組細胞脫顆粒的情況，ELISA法檢測細胞培養(yǎng)液中TNF-α、MCP，IL-1β、IL-6以及IL-13的水平，以了解各組細胞的內(nèi)毒素耐受是否被打破。
　　5.在成功誘導(dǎo)針對LPS內(nèi)毒素耐受的基礎(chǔ)上，分別以(0，100pg/ml)濃度的CRF處理內(nèi)毒素耐受的肥大細胞，并設(shè)置以CRF拮抗劑預(yù)處理的CRF-anta組，后予以LPS激發(fā)，收集細胞進行real-time PCR和Western blot檢測SCOS-1和SC

17、OS-3 mRNA和蛋白的表達。
　　結(jié)果:
　　1.在體外以100ng/mL濃度的LPS預(yù)處理的HMC-1肥大細胞，再次以100ng/mL的LPS激發(fā)后，較未誘導(dǎo)耐受的naive細胞相比，其釋放的TNF-α、IL-1β、IL-6以及IL-13的水平顯著下降(P＜0.05)，MCP的水平則無顯著差異(P＞0.05)。各組細胞均未發(fā)生脫顆?，F(xiàn)象。提示內(nèi)毒素耐受成功建立。
　　2.以不同濃度的CRF處理內(nèi)毒素耐受的HMC-

18、1肥大細胞，發(fā)現(xiàn)相對于對照組，100pg/ml的CRF可以顯著上調(diào)肥大細胞表面的TLR4 mRNA和蛋白的表達（P＜0.05），這個作用可以被CRF-R1和Erk1/2的拮抗劑所解除。各組細胞間TLR2mRNA和蛋白的表達沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　3.設(shè)計合成shRNA，構(gòu)建慢病毒載體對HMC-1肥大細胞進行轉(zhuǎn)染，對TLR4基因進行基因沉默，成功構(gòu)建了TLR4 null的肥大細胞。
　　4.按步驟2中處理的各組細

19、胞及TLR4 null的細胞，予以LPS激發(fā)，發(fā)現(xiàn)100pg/ml的CRF有雙重作用:它可以引起HMC-1肥大細胞發(fā)生脫顆粒反應(yīng)，釋放MCP和TNF-α;同時，它可以打破肥大細胞的內(nèi)毒素耐受，釋放IL-1β、IL-6、IL-13和TNF-α。CRF誘導(dǎo)肥大細胞脫顆粒的作用可以被CRF-R1和CRF-R2拮抗劑所解除;而CRF打破內(nèi)毒素耐受的作用，可以被CRF-R1和Erk1/2的拮抗劑所解除。TLR4 null的細胞，既不能建立對LPS

20、內(nèi)毒素耐受，也不能被CRF誘導(dǎo)打破耐受。
　　5.對內(nèi)毒素耐受的肥大細胞予以100pg/ml的CRF處理，相對于對照組，其信號抑制蛋白SCOS-1和SCOS-3 mRNA和蛋白的表達顯著下降(P＜0.05)，這種作用可以被CRF受體拮抗劑所阻斷。
　　結(jié)論:
　　CRF可以通過兩種途徑激活肥大細胞:一是與肥大細胞上的CRF-R1和CRF-R2結(jié)合，直接引起肥大細胞脫顆粒，導(dǎo)致MCP和TNF-α釋放。二是與肥大細胞上的C

21、RF-R1結(jié)合，通過細胞內(nèi)的Erk1/2信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，上調(diào)肥大細胞表面TLR4的表達;同時，下調(diào)了對LPS-TLR4-NFκB通路有抑制作用的細胞因子信號抑制蛋白SCOS-1和SCOS-3的表達，最終導(dǎo)致肥大細胞對LPS的內(nèi)毒素耐受被打破，LPS-TLR4途徑的細胞因子IL-1β、IL-6、IL-13和TNF-α釋放。
　　第二部分 CRF調(diào)控肥大細胞導(dǎo)致腸道屏障功能障礙的機制研究
　　目的:
　　腸道屏障功能障礙會導(dǎo)

22、致腸黏膜通透性增高，腸道內(nèi)共生菌的某些成分和大分子食物抗原進入并激活腸道免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致患者出現(xiàn)IBS的癥狀。上皮細胞間的緊密連接蛋白和細胞膜上表達的某些離子通道蛋白(比如TWIK-relatedpotassium channel-1，Trek1)對于維持腸道屏障功能有重要作用。目前，CRF激活肥大細胞引起腸道屏障功能障礙的機制不完全明確，尤其是CRF調(diào)控肥大細胞打破內(nèi)毒素耐受后，LPS-TLR4途徑所釋放的細胞因子引起腸道屏障功能障礙的

23、機制尚不清楚，是本研究旨在解決的問題。
　　材料與方法
　　1.6-8周齡Balb/c小鼠40只，分為對照組（Control組）、避水應(yīng)激組(Stress組)、假避水組（Sham組）、CRF拮抗劑（CRF-anta組）、肥大細胞穩(wěn)定劑（MC stabilizer組），分別給予不同的干預(yù)后，按照避水程序進行避水。Control組不避水，Sham組水槽中不加水。第10天避水結(jié)束后處死小鼠，取血清及結(jié)腸組織。新鮮組織進行尤斯室實驗

24、;另取組織用4％多聚甲醛固定后石蠟包埋、切片，行HE染色和免疫熒光檢測;留取組織凍存于-80℃低溫冰箱，待行Realtime-PCR和Western blotting檢測。
　　2.ELISA法檢測各組小鼠血清中IL-1β、IL-6、IL-13、TNF-α和MCP的水平。
　　3.將新鮮結(jié)腸組織剝離漿膜層和肌層，放入尤斯室后平衡30分鐘，待短路電流(Isc)穩(wěn)定后，使用數(shù)據(jù)采集軟件，每30分鐘在尤斯室中記錄跨膜電導(dǎo)G、短路電

25、流Isc，共2小時。以HRP(44kD)作為蛋白探針模型用于檢測黏膜對大分子物質(zhì)的通透性變化，以HRP回收率(HRP％)表示黏膜對HRP的通透性。
　　4.分別提取結(jié)腸組織的總RNA和總蛋白，real-time PCR和Western blot法檢測claudin5，7，8，12，15和Trek1 mRNA和蛋白的表達。
　　5.免疫熒光法檢測Trek1蛋白在結(jié)腸組織中的表達。
　　6.將人結(jié)腸上皮細胞系T84細胞接種

26、于Transwell系統(tǒng)內(nèi)，制備單層細胞層，分別加入CRF激活肥大細胞后釋放的細胞因子IL-1β，IL-6，IL-13，MCP或TNF-α，觀察它們對T84上皮細胞層Trek1 mRNA和蛋白的影響。
　　結(jié)果:
　　1.ELISA法對各處理組小鼠血清中的MCP、TNF-α、IL-1β、IL-6以及IL-13水平進行檢測，發(fā)現(xiàn)Stress組小鼠血清中5種細胞因子的水平顯著高于其它4組(P＜0.05)，其它4組間差異無統(tǒng)計學(xué)意

27、義。
　　2.尤斯室中測得Stress組小鼠的G、Isc以及HRP回收率均顯著高于Control組和Sham組（P＜0.05）;而CRF-anta組和MC stabilizer組G、Isc以及HRP回收率均顯著低于Stress組（P＜0.05），與Control組和Sham組相比則無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。提示在應(yīng)激反應(yīng)下，小鼠結(jié)腸黏膜的通透性增高，但這種作用可以被CRF受體拮抗劑和肥大細胞穩(wěn)定劑所拮抗。
　　3.結(jié)腸組

28、織的HE染色提示相較于對照組和假避水組，Stress組結(jié)腸上皮細胞排列紊亂，上皮細胞間的間隙變大。而CRF拮抗劑和肥大細胞穩(wěn)定劑組小鼠的結(jié)腸HE染色與對照組和假避水組相比，結(jié)構(gòu)相似，無明顯的差異。
　　4.對各組小鼠結(jié)腸組織進行Trek1和Claudin5，7，8，12，15mRNA和蛋白檢測，結(jié)果顯示各組間Claudin5，7，8，12，15mRNA和蛋白表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義。而Trek1 mRNA和蛋白的表達水平在各組間有差異

29、，Stress組的Trek1 mRNA和蛋白顯著低于其他4組(P＜0.05)，提示應(yīng)激小鼠結(jié)腸組織中Trek1 mRNA和蛋白顯著降低，但經(jīng)過CRF受體拮抗劑和肥大細胞穩(wěn)定劑干預(yù)后，Trek1 mRNA和蛋白的水平可恢復(fù)。
　　5.用免疫熒光法檢測各組小鼠結(jié)腸組織中的Trek1蛋白的表達（用FITC標記的綠色熒光表示），與mRNA和蛋白的檢測結(jié)果一致，Stress組小鼠結(jié)腸的Trek1蛋白的熒光強度顯著低于其他4組。
　　6

30、.IL-1β，IL-6，IL-13，MCP或TNF-α干預(yù)T84上皮細胞層后，Trek1 mRNA和蛋白的表達均顯著低于對照組(P＜0.05)。由于這幾種細胞因子都可以激活P38MAPK途徑，我們重復(fù)了上述實驗過程，在培養(yǎng)液中預(yù)先加入了p38抑制劑，發(fā)現(xiàn)進行了這幾種細胞因子對Trek1 mRNA和蛋白的抑制作用被解除。
　　結(jié)論:
　　CRF可調(diào)控肥大細胞導(dǎo)致避水應(yīng)激的小鼠腸黏膜透性增高，這種作用是通過CRF激活肥大細胞所釋

31、放的細胞因子IL-1β，IL-6，IL-13，MCP和TNF-α通過p38MAPK途徑抑制結(jié)腸上皮細胞中Trek1的表達實現(xiàn)的。
　　第三部分雙孔鉀離子通道蛋白Trek1對腸道屏障功能的調(diào)節(jié)作用
　　目的:
　　腸道屏障功對于維持全身的免疫穩(wěn)態(tài)有著重要的意義。然而，導(dǎo)致IBS患者腸道屏障功能障礙的機制并不完全明確，改善腸道屏障功能的治療方法也很有限。雙孔鉀離子通道Trek1蛋白定位于上皮細胞和血管內(nèi)皮細胞，在肺泡上皮細

32、胞、心血管內(nèi)皮細胞和腸上皮細胞均有表達。近期研究表明Trek1能夠調(diào)整肺泡上皮屏障功能、血腦屏障功能、神經(jīng)-免疫細胞屏障功能。在第二部分研究中，我們發(fā)現(xiàn)Trek1的表達下調(diào)的結(jié)腸黏膜的通透性增加，推測Trek1的表達可以調(diào)節(jié)腸道屏障功能。在本研究中，將進一步探討Trek1與腸道屏障功能的關(guān)系。
　　材料與方法:
　　1.體外培養(yǎng)腸上皮系T84細胞，待細胞生長狀況良好將其以106 cells/ml的濃度將三組細胞接種于的Mil

33、lpore Transwell系統(tǒng)的insert（無包被，濾孔直徑為0.4μm）中制作單細胞層。每日用Millicell-ERS的歐姆儀檢測T84單層的跨膜電阻TER，當(dāng)TER大于1000Ω/cm2時，開始進行后續(xù)的實驗。
　　2.使用shRNA法，對T84細胞進行基因沉默。設(shè)空載質(zhì)粒對照組cshRNA和PBS處理的Medium組。
　　3.使用Millicell-ERS歐姆儀分別于0h、8h、16h、2d、3d、4d、5d

34、、6d、7d這9個時間點記錄各組單細胞層的TER值。
　　4.將HRP以10-5mol/L的濃度加入上室，30分鐘后分別收集上室和下室的細胞培養(yǎng)液，檢測HRP酶的活性。對HRP的通透性以HRP回收率（HRP％）表示。
　　5.在基因沉默的T84單層細胞中按照0，10，100，1000nmol/L的濃度梯度加入重組蛋白rTrek1。設(shè)立以無關(guān)蛋白BSA處理的陰性對照和無任何處理的wild組作為陽性對照。分別檢測各組單層細胞的跨

35、膜電阻TER和HRP％。
　　結(jié)果:
　　1.對T84細胞分別進行shRNA、陰性對照（cshRNA）以及中性緩沖液PBS(medium)處理，Western blot的結(jié)果提示在進行shRNA轉(zhuǎn)染處理的0-7天中，T84單層細胞中Trek1蛋白的表達從第1d開始下降，到第2d顯著下降，始終維持在很低的水平，一直到7d，提示我們shRNA操作是成功的。灰度分析顯示shRNA組中Trek1蛋白的表達水平(β-actin％)顯著

36、低于cshRNA及medium組（P＜0.05）。
　　2.對T84細胞的Trek1基因進行沉默后，T84單層上皮細胞層的TER從第16h開始下降，到第48h顯著下降，并且一直維持較低的水平至第7天，從第16h到第7d，shRNA組中T84單層細胞跨膜電阻TER始終顯著低于cshRNA及medium組(P＜0.05)。
　　3.在對T84細胞的Trek1基因進行沉默后，HRP％從第16h開始升高，到第48h顯著升高，并且一直

37、維持較高的水平至第7天，從第16h到第7d，shRNA組中T84單層細胞對HRP的回收率HRP％始終顯著高于cshRNA及medium組（P＜0.05）。
　　4.經(jīng)100nM、1000nM rTrek1處理的Trek1 null T84細胞，其單層細胞跨膜電阻TER均顯著高于0nM，10nM rTrek1處理組和BSA處理組（P＜0.05），提示再加入重組的rTrek1后，基因沉默引起的T84單層細胞跨膜電阻TER恢復(fù)正常。

38、r>　　5.經(jīng)100nM、1000nM rTrek1處理的Trek1 null T84細胞，其單層細胞對HRP通透性（HRP％）均顯著低于0nM，10nM rTrek1處理組和BSA處理組（P＜0.05），提示再加入重組的rTrek1后，基因沉默引起的T84單層細胞對HRP通透性升高的現(xiàn)象顯著改善。
　　結(jié)論:
　　結(jié)腸上皮細胞表達Trek1，體外將T84細胞的Trek1基因進行沉默可導(dǎo)致腸上皮屏障的通透性增高，再加入重組的