1、近年來，“回歸自然”的浪潮使中藥備受關(guān)注，中藥現(xiàn)代化的步伐越來越快。中藥現(xiàn)代化進程中主要面臨著兩方面的問題：①中藥成分復雜，并且成分之間相互影響和作用，同一成分化合物的分析結(jié)果可能會因母體藥材或制劑配方的改變而受到不同程度的影響。故建立簡單、可靠的中藥及其復方中活性成分的分析方法是實現(xiàn)中藥現(xiàn)代化的基本前提之一。②中藥的有效成分是新藥開發(fā)的先導，但是中藥的藥效成分與生物體內(nèi)的代謝作用機理還不是十分清晰，因此建立靈敏、準確、快速生物樣品中中

2、藥活性成分的測定分析方法，為進一步實現(xiàn)中藥藥代動力學的研究就顯得尤為迫切。聯(lián)用色譜技術(shù)的發(fā)展為中藥的質(zhì)量控制研究和中藥藥效物質(zhì)基礎研究提供了一個高效、可靠的分析方法?；诖?，本文主要開展了以下幾方面的創(chuàng)新性研究工作： (1)采用分子印跡技術(shù)，以表兒茶素作為模板分子，丙烯酰胺為功能單體，乙烯基二甲基丙烯酸酯為交聯(lián)劑，合成了表兒茶素分子印跡聚合物。用紅外光譜和掃描電子顯微鏡表征了所合成的分子印跡聚合物。通過篩分，粒子尺寸在15和38

3、μm之間的分子印跡聚合物被選為固相萃取吸附劑。結(jié)果表明：分子印跡聚合物對表兒茶素具有較高的分子識別能力和選擇性。而空白聚合物卻不具備這樣的特性。在此基礎上，把此分子印跡聚合物固相萃取小柱用于萃取茶葉提取物，分離富集其中的活性成分單體表兒茶素，獲得了滿意的結(jié)果。 (2)我們選取了梔子中的主要生物活性物質(zhì)梔子甙為目標分析物，建立了用于分析梔子和梔子中藥制劑清火梔麥片中的梔子甙的高效液相色譜一二極管陣列—質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC—DAD—E

4、SI/MS)分析方法。為了進一步更全面的對梔子中藥制劑清火梔麥片進行質(zhì)量控制，針對現(xiàn)有分析梔子中藥制劑的缺陷，發(fā)展了簡便、靈敏的高效液相色譜—二極管陣列—質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC—DAD—ESI/MS)方法同時分析中藥梔子復方制劑清火梔麥片及其原料藥材中的活性物質(zhì)脫水穿心蓮內(nèi)酯，穿心蓮內(nèi)酯和梔子甙。這三種活性成分主要用來作為清火梔麥片的質(zhì)量控制的標志物。相對于其他分析方法，此方法提供了更多的定性、定量信息，同時能更全面的對中藥復方制劑進行質(zhì)量

5、控制。 (3)針對現(xiàn)有的流動相體系不能對橘屬中藥中生物堿類和黃酮類兩種不同色譜保留行為的活性物質(zhì)同時分析測定的現(xiàn)狀，且對生物堿類分析的流動相不適合于液質(zhì)聯(lián)用分析，我們采用揮發(fā)性全氟羧酸為離子對添加劑，解決了生物堿類物質(zhì)辛氟林的低保留和峰拖尾，并考察了對黃酮類物質(zhì)的色譜保留行為的影響，首次成功地建立了橘屬中藥中生物堿類和黃酮類物質(zhì)同時分析的高效液相色譜一二極管陣列—質(zhì)譜聯(lián)用(HPLC—DAD—ESI/MS)分析方法。并且把這種方法

6、應用于橘屬中藥青皮、陳皮、枳實和枳殼的全面質(zhì)量控制中，獲得滿意的結(jié)果。 (4)以中藥人參中的大分子量活性化合物人參皂甙為研究對象，研究了高錐孔電壓對其電離效率，檢測靈敏度的影響。建立了簡單、靈敏的分析人參皂甙的高效液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用分析方法。高錐孔電壓的采用能大大提高檢測靈敏度，并且得到用于人參皂甙結(jié)構(gòu)鑒定的加合離子和特征碎片離子。分析方法的線性范圍在5-2×105之間，線性相關(guān)系數(shù)超過0.990，檢測限達到pg級。該方法成功地

7、應用于人參以及人參制劑中的人參皂甙的分析檢測中，為其質(zhì)量控制提供了更為簡單、有效的檢測方法。 (5)在本章中，建立了磁性納米粒子—微波萃取的新方法用于中藥中的有效成分的提取。這種新方法基于磁性納米粒子能夠吸收輻射的微波，把磁性納米粒子作為中間媒介吸收微波。以中藥黃芩的有效成分提取為例，磁性納米粒子—微波萃取整個的萃取過程只需要40 s的微波輻射時間。而且，與一般的微波萃取相比，加入磁性納米粒子的萃取效率更高，需要的有機溶劑更少。

8、得到的提取物用高效液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用分析。本文所建立的方法的回收率在97.6—104.1％之間，相對標準偏差小于2.5％。黃芩苷，黃芩素，漢黃芩素的檢測限分別為0.05，1.0和2.0 ng/mL。此方法成功地應用到了實際樣品中有效成分地提取分析檢測。 (6)為了保護動物，減少或取代動物實驗，體外評估化學藥品對細胞的毒性作用對于開發(fā)新藥用于治療各種各樣的癌癥具有十分重要的作用。盡管伊立替康對白血病、消化道和卵巢腫瘤具有較好的治療

9、作用，而對乳腺癌治療的報道很少。本文首次以乳腺癌細胞MCF—7為模型，體外評估了伊立替康對乳腺癌細胞的毒性后，建立了快速、簡單的HPLC—ESI/MS測定細胞中伊立替康及其代謝產(chǎn)物SN—38的方法，本法采用—80℃甲醇一步沉淀蛋白，線性范圍可達3個數(shù)量級，線性相關(guān)系數(shù)大于0.9995，且方法特異性高，基質(zhì)效應小，具有合適的精密度和靈敏度。該法成功地測定了伊立替康作用不同時間下的MCF—7細胞內(nèi)的藥物濃度，對抗腫瘤藥物伊立替康的細胞藥物代

10、謝動力學進行了初淺地探討。 (7)樣品制備在HPLC的生物樣品分析中是關(guān)鍵性的一步，經(jīng)典的樣品預處理包括蛋白質(zhì)沉淀和藥物萃取。此方法的缺點是大大增加了勞動量和分析時間，同時由于分析物在沉積蛋白質(zhì)上的吸附而降低了回收率。直接進樣技術(shù)在節(jié)約時間和勞力方面顯示出了相當大的優(yōu)越性。本工作應用簡單、可靠的膠束液相色譜(micellar liquid chromatography，MLC)法直接進樣分析了生物樣品中的隱丹參酮和丹參酮ⅡA。隱