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![自噬在乙型肝炎病毒感染中的作用研究.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/10/8/24be4701-412a-4148-b271-34754127d5ad/24be4701-412a-4148-b271-34754127d5ad1.gif)
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文檔簡介
1、目的:自噬作為先天性免疫的一部分在多種病原體的入侵過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的保護性作用,乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的感染可以誘導(dǎo)自噬的發(fā)生,但該自噬過程對HBV并沒有清除作用。本課題主要研究HBV所誘導(dǎo)的自噬無法清除 HBV的原因及其潛在的機制。
方法:HBV質(zhì)粒p1.3HBV(pHBV)轉(zhuǎn)染HepG2(pHepG2)細胞,western blot方法檢測HepG2細胞、pHepG2細胞、饑餓誘導(dǎo)自
2、噬處理的HepG2細胞及穩(wěn)定表達HBV DNA的HepG2.2.15細胞中自噬相關(guān)蛋白(autophagy-related protein,Atg)5、微管相關(guān)蛋白輕鏈(microtubule-associated protein light chain3-II,LC3-II)的表達。透射電鏡的方法直接觀察 HepG2細胞和 pHepG2細胞中自噬小體的形成。將pHBV質(zhì)粒通過尾靜脈高壓注射C57BL/6構(gòu)建小鼠肝炎模型,96小時后收集
3、小鼠血清和肝組織,分別用 Roche COBAS HBV Amplicor MonitorTM和ARCHITECT i2000SR HBsAg QT的方法檢測小鼠血清中HBV DNA和乙肝表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)的含量;蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin,H&E)染色的方法分析小鼠肝臟組織學(xué)改變情況;western blot的方法分析小鼠肝組織中Atg5和 LC3-II
4、的表達;熒光共聚焦顯微鏡檢測HepG2細胞和pHepG2細胞中自噬小體與溶酶體融合形成自噬溶酶體的情況;半定量PCR方法檢測HepG2細胞、pHepG2細胞、饑餓誘導(dǎo)自噬處理的HepG2細胞及HepG2.2.15細胞中Ras相關(guān)蛋白7(Ras-related protein7,Rab7)mRNA的表達情況,western blot方法檢測上述四組細胞中 Rab7蛋白的表達情況。
結(jié)果:與對照組相比,pHepG2細胞、HepG2
5、.2.15細胞和饑餓誘導(dǎo)自噬處理的HepG2細胞中Atg5和LC3-II的表達均明顯升高;此外,透射電鏡觀察到,與HepG2細胞相比,自噬小體在pHepG2細胞中的積聚更明顯;pHBV質(zhì)粒尾靜脈高壓注射可以引起小鼠肝臟明顯的炎性改變,肝炎小鼠肝組織中 Atg5和LC3-II的表達也明顯升高;關(guān)于自噬流變化的研究中發(fā)現(xiàn),pHepG2細胞中自噬小體和溶酶體的融合受阻;此外,與對照組相比,Rab7在饑餓誘導(dǎo)自噬處理的HepG2細胞中明顯升高,
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