1、背景:
　　鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是我國(guó)南方地區(qū)常見的一種頭頸部惡性腫瘤，發(fā)病率占世界80％左右。鼻咽癌在臨床上的病理分型主要為低分化鱗癌，對(duì)射線敏感，手術(shù)治療難以根治。放療是目前鼻咽癌的首要治療手段，但是容易發(fā)生復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，治療失敗的主要原因是鼻咽癌組織中存在一定比例的放射抗拒細(xì)胞細(xì)胞。因此研究放射抗拒機(jī)制，尋找放射增敏途徑成為亟待解決的問(wèn)題。由于腫瘤細(xì)胞存在異質(zhì)性，即使組織學(xué)上分化相

2、同的鱗狀細(xì)胞癌也會(huì)表現(xiàn)出不同的放射敏感性。顯然，如果以同一來(lái)源但具有不同放射敏感性的一對(duì)細(xì)胞為對(duì)象進(jìn)行放射敏感性相關(guān)因素對(duì)照研究，將有更多的優(yōu)勢(shì)。
　　目的:
　　體外實(shí)驗(yàn)?zāi)M鼻咽癌臨床常規(guī)分割放療，建立經(jīng)大劑量射線照射后放射抗拒細(xì)胞模型CNE1/70R。研究?jī)芍昙?xì)胞放射敏感性，藥物敏感性，及經(jīng)射線照射后凋亡，細(xì)胞周期變化的差異。用裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)體內(nèi)驗(yàn)證放射抗拒株細(xì)胞CNE1/70R與放射敏感株細(xì)胞CNE1在生長(zhǎng)速度方面差異。

3、初步探討兩株細(xì)胞周期相關(guān)蛋白CUEDC2的表達(dá)與放射抗拒之間的關(guān)系。通過(guò)應(yīng)用含人類全基因組序列芯片對(duì)兩個(gè)放射敏感性不同的鼻咽癌細(xì)胞株進(jìn)行檢測(cè)，比較其基因表達(dá)譜的變化，尋找與鼻咽癌放射敏感性密切相關(guān)的基因。
　　方法:
　　將復(fù)蘇的人鼻咽癌細(xì)胞系CNE1進(jìn)行培養(yǎng)、傳代，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。用臨床常規(guī)分割根治劑量70Gy（6Mv X線，70Gy/35天，2Gy/天，1次/日，5次/周）體外照射，建立鼻咽癌細(xì)胞模型CNE1

4、/70R。生長(zhǎng)曲線檢測(cè)細(xì)胞倍增時(shí)間。MTT法檢測(cè)不同濃度多西紫杉醇(100、10、1、0.1、0.01μmol/L)、順鉑（1、0.1、0.01、0.001、0.0001μg/ml）對(duì)兩株細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用。細(xì)胞照射0，1，2，3，4，6，8Gy后，利用克隆形成實(shí)驗(yàn)，擬合細(xì)胞存活曲線，比較放射敏感性。流式細(xì)胞術(shù)AnnexinⅤ/PI染色法檢測(cè)細(xì)胞經(jīng)0、4、8、12Gy照射后細(xì)胞凋亡發(fā)生率的變化，流式細(xì)胞PI染色檢測(cè)兩株細(xì)胞經(jīng)8Gy照射周

5、期的改變?；蛐酒夹g(shù)檢測(cè)兩株細(xì)胞的差異表達(dá)的基因。裸鼠實(shí)驗(yàn)體內(nèi)驗(yàn)證兩株細(xì)胞生長(zhǎng)速度。Western Blot檢測(cè)兩株細(xì)胞CUEDC2蛋白的表達(dá)，qRT-PCR檢測(cè)兩株細(xì)胞CUEDC2基因的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　(1) CNE1/70R細(xì)胞群體倍增時(shí)間長(zhǎng)于親代細(xì)胞。CNE1、CNE1/70R倍增時(shí)間分別為（1.483±0.046）d，(1.586±0.069)d。(2)細(xì)胞株CNE1/70R形成集落能力強(qiáng)于CNE1細(xì)胞，放

6、射生物學(xué)相關(guān)指標(biāo)均提示CNE1/70R較CNE1具有放療抵抗，并且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異p＜0.05。(3)放射抗拒細(xì)胞CNE1/70R與敏感株相比對(duì)藥物敏感性升高，多西紫杉醇和順鉑對(duì)CNE1和CNE1/70R細(xì)胞有明顯的抑制作用，IC50分別為0.049μmol/L vs0.001μmol/L。1.008μg/mL vs0.337μg/mL，CNE1/70R對(duì)多西紫杉醇利順鉑的敏感性增加。(4)細(xì)胞周期的結(jié)果顯示，細(xì)胞經(jīng)8Gy射線照射24小時(shí)

7、后，G0/G1期，S期細(xì)胞數(shù)減少，G2/M期細(xì)胞數(shù)增多，CNE1、CNE1/70R均出現(xiàn)G2/M期阻滯，CNE1細(xì)胞G2/M期阻滯更明顯。CNE1與CNE1/70R周期改變差異(p＜0.05)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(5)細(xì)胞照射0Gy，4Gy，8Gy，12Gy后，兩細(xì)胞凋亡率均隨劑量增加而增加，CNE1細(xì)胞早期、晚期凋亡率均高于CNE1/70R細(xì)胞，兩細(xì)胞凋亡率比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。(6)人鼻咽癌放射抗拒株細(xì)胞移植瘤生長(zhǎng)速度

8、較人鼻咽癌放射敏感細(xì)胞移植瘤慢。(7)兩組鼻咽癌細(xì)胞株基因都有差異的共有1191條，1172條表達(dá)上調(diào)，19條表達(dá)下調(diào)。功能涉及不同的分子功能分類，參與多個(gè)生物學(xué)過(guò)程。(8) qRT-PCR結(jié)果顯示放射抗拒株細(xì)胞CNE1/70R的CUEDC2基因相對(duì)表達(dá)較CNE1細(xì)胞有所上調(diào)。Western Blot結(jié)果顯示CNE1/70R的CUEDC2蛋白表達(dá)量較CNE1表達(dá)升高。
　　結(jié)論:
　　(1)采用臨床常規(guī)分割放療方法單次2Gy

9、照射35次模式可建立穩(wěn)定的人鼻咽癌放射抗拒株CNE1/70R。
　　(2)生長(zhǎng)速度:細(xì)胞生長(zhǎng)曲線實(shí)驗(yàn)、裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)均顯示鼻咽癌放射抗拒株細(xì)胞CNE1/70R生長(zhǎng)速度較鼻咽癌放射敏感株細(xì)胞CNE1慢。
　　(3)藥物敏感性:鼻咽癌抗拒株細(xì)胞CNE1/70R細(xì)胞對(duì)化療藥物多西紫杉醇、順鉑更加敏感。臨床上為復(fù)發(fā)鼻咽癌患者治療提供新的理論基礎(chǔ)。
　　(4) CNE1/70R細(xì)胞株較親本細(xì)胞具有更突出的放射抗拒性，周期改變減小及