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文檔簡介
1、目的:研究hUC-MSCs局部移植對小鼠全層皮膚切除創(chuàng)面愈合的影響,為hUC-MSCs用于皮膚創(chuàng)面治療提供理論依據(jù)。
方法:采用組織塊貼壁法進行hUC-MSCs的分離和培養(yǎng),流式細胞術(shù)檢測細胞免疫表型,并作誘導向成骨、成脂細胞方向分化。用CM-Dil對 hUC-MSCs進行體外標記,觀察標記后細胞生物學特征, MTT法檢測CM-Dil標記后hUC-MSCs增殖能力的變化。采用BALB/c小鼠建立全層皮膚缺損創(chuàng)面模型,隨機分為h
2、UC-MSCs組和PBS組,分別于創(chuàng)周注射 hUC-MSCs懸液和 PBS液。分別于術(shù)后3、7、14 d觀察創(chuàng)面的愈合情況,HE染色檢測病理學改變,免疫組織化學檢測VEGF和CD34的表達,免疫熒光檢測hUC-MSCs在創(chuàng)面的蹤跡及創(chuàng)面細胞增殖情況,Western blot檢測創(chuàng)面VEGF蛋白的表達。
結(jié)果:組織塊貼壁法可快速分離出大量有生物學活性的hUC-MSCs,流式細胞術(shù)檢測提示所培養(yǎng)的細胞為hUC-MSCs,并且體外可
3、被誘導向成骨、成脂方向分化。CM-Dil能有效的標記hUC-MSCs,標記率為(95.90±1.79)%,連續(xù)傳代培養(yǎng)至15 d后標記率仍達(87.90±1.90)%,MTT檢測發(fā)現(xiàn)CM-Dil標記對hUC-MSCs的增殖能力無影響。hUC-MSCs組創(chuàng)面愈合率在各時間點均較 PBS組明顯增高(P<0.05)。病理學顯示hUC-MSCs組創(chuàng)面愈合質(zhì)量優(yōu)于PBS組。免疫組化顯示hUC-MSCs組創(chuàng)面VEGF在3 d表達最多,7、14 d逐
4、漸減少,但均較PBS組增高。hUC-MSCs組創(chuàng)面血管數(shù)目在3、7 d均顯著高于PBS組(P<0.05),但在14 d兩組創(chuàng)面血管數(shù)目無顯著差異(P>0.05)。免疫熒光顯示CM-Dil陽性細胞3 d時最多,7 d略減少(P>0.05),而在14 d時明顯減少(P<0.05),hUC-MSCs組創(chuàng)面新生表皮中BrdU陽性細胞率7、14 d均較PBS組增加(P<0.05),創(chuàng)面肉芽組織中BrdU陽性細胞率在3、7 d都較PBS組增加(P<
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