1、款冬花為菊科款冬屬植物——款冬（Tussilago farfara L.）的干燥花蕾，是一種常用中藥，具有潤肺下氣，化痰止咳的功效，在歷版《中國藥典》中均有記載。款冬花是重慶的一種道地藥材，具有良好的應用前景。國內外關于款冬花的基礎研究主要集中于款冬酮、蘆丁、槲皮素等幾種常見的有效成分，現行的質量控制標準也只對款冬酮進行含量限定，質控指標單一，缺乏針對有效的質量控制指標和相應的質控方法，款冬花藥材質量、用藥的有效性和安全性難以保證。

2、r>　　針對上述問題，本論文在總結近年來關于天然植物分離分析和質量控制的文獻基礎上，將提取分離、純化和分析檢測技術有機結合，根據款冬花中不同類型化學成分的性質和特點，提出了多指標、多參數質控體系，重點針對款冬花的標示成分（款冬酮）、有效成分（黃酮類、有機酸類等）、毒性成分（生物堿）和可綜合利用成分（多糖）這四個方面，開展了多種化學成分的高效分析方法和技術的研究，最終提出了款冬花藥材質量控制指標的新方案建議。
　　本文的主要研究工作

3、及結果如下：
　?、賹疃ǖ幕瘜W成分、分離分析方法、藥理活性等進行了系統(tǒng)的文獻綜述，結合近年來天然植物分離分析和質量控制的相關研究，提出了款冬花質量控制指標研究的總體方案。
　?、诟鶕疃ㄖ杏行С煞帧⒍拘猿煞?、可綜合利用成分的性質和特點，采用溶劑提取法對款冬花中有效成分進行了提取，應用柱層析、制備薄層色譜等技術對款冬花甲醇提取物的石油醚和乙酸乙酯萃取浸膏進行系統(tǒng)分離，分離并鑒定了8種化合物。采用酸水提取法制備了款冬花總生

4、物堿，通過酸性染料比色法測定了款冬花酸提物和總生物堿中的生物堿含量。采用水提醇沉法制備了款冬花多糖，然后經分級醇沉獲得三種醇沉多糖即40％多糖（TPS-1）、60%多糖（TPS-2）、80%多糖（TPS-3），為款冬花有效成分、毒性成分、可綜合利用成分的的分析提供了物質基礎。
　?、蹜肏PLC技術分析了款冬酮所處的萃取部位，研究了HSCCC溶劑體系的篩選方法，提出了高效分離的三元兩相溶劑體系，建立了款冬酮快速分離制備的技術路線，

5、同時制備了14-acetoxy-7β-(3'-ethyl cis-crotonoyloxy)-lα-(2'-methylbutyryloxy)-notonipetranone，為標示成分的高效制備和質量控制研究奠定了基礎。
　?、懿捎媚z束毛細管電泳模式對款冬花甲醇提取物中的款冬酮進行了檢測，測得藥材中款冬酮含量為1.66 mg·g-1；重點開展了黃酮類、有機酸類等多種有效成分的HPCE同時測定研究，優(yōu)化了影響電泳分離的主要參數，獲

6、得了款冬花甲醇提取物的最優(yōu)分離條件，實現了款冬花中多種成分的在線同時檢測，識別了2,2-二甲基-6-乙?；讲⒍溥拎?、蘆丁、異阿魏酸、金絲桃苷、阿魏酸、綠原酸、異綠原酸、槲皮素、沒食子酸、咖啡酸等10種有效成分，并測定了除沒食子酸外其他9種有效成分的含量。
　?、葆槍疃ㄖ卸拘陨飰A含量低、難以檢測的問題，首先應用吡咯顯色法開展了總生物堿中的RET-PAs的衍生化研究，實現了總生物堿中RET-PAs的定量測定；然后采用場放大

7、進樣-膠束掃集兩步富集技術，優(yōu)化了影響分離和富集效果的因素，建立了基于HPCE技術的款冬花PAs高效快速分析方法，實現了款冬花總生物堿中克氏千里光堿和千里光寧堿的高效定量檢測。與常規(guī)MEKC相比，該富集方法靈敏度有了較大的提高，富集倍數為12倍和15倍，檢測限達2.8μg·L-1和4.2μg·L-1。并通過UV和MS技術鑒定了總生物堿中其他兩種主要化合物，咖啡酸甲酯和阿魏酸甲酯。該方法還被應用到款冬花酸性提取物的PAs檢測中，實現了克氏

8、千里光堿的有效檢測。
　?、掎槍疃ǘ嗵堑木C合利用需要，應用苯酚硫酸法和間羥基聯苯比色法考察了款冬花多糖（TPS）及三種醇沉多糖（TPS-1、TPS-2、TPS-3）的中性糖和酸性糖含量，通過紅外對其構型進行了初步分析。結合多糖的多羥基結構，建立了PMP-CZE快速分析款冬花多糖中7種單糖的分析方法，優(yōu)化了影響電泳分離的主要參數，確定了最優(yōu)分析條件，實現了對款冬花多糖和三種醇沉多糖的單糖組成的快速分離和定量分析，為款冬花多糖組分

9、的質量控制提供了有效的方法。采用DPPH法和CAA法分別從分子和細胞水平評價了粗多糖和三種醇沉多糖的抗氧化活性。測定結果顯示款冬花多糖和三種醇沉多糖均具有抗氧化活性，其中 TPS-2具有最強的抗氧化能力。結合酸性多糖的分子量、抗氧化活性及單糖組成信息，發(fā)現多糖的抗氧化活性與分子量、單糖組成有關。
　?、呋谏鲜鲅芯浚瑥臉耸境煞?、有效成分、毒性成分三個方面，初步設計了款冬花藥材中質量控制指標的分析檢測提高方案。新方案將影響用藥有效性