1、背景與目的：
　　膿毒癥和膿毒性休克是當(dāng)前危重癥患者死亡的主要原因，是亟待解決的現(xiàn)代醫(yī)學(xué)難題。膿毒癥的發(fā)病機制至今未明，一般認為是遺傳背景、病原微生物和環(huán)境因素多重作用的共同結(jié)果，其中遺傳因素作為個體對病原微生物和環(huán)境因素反應(yīng)的背景作用越來越受到人們的關(guān)注。
　　TLR4作為識別革蘭陰性細菌致病成分的“模式”識別受體，在膿毒癥的發(fā)生與發(fā)展中具有重要地位。TLR4與革蘭陰性菌細胞壁主要成分脂多糖(lippolysacchari

2、de，LPS)結(jié)合，將刺激信號傳入宿主細胞內(nèi)，介導(dǎo)革蘭陰性菌的宿主非特異炎性反應(yīng)。本研究旨在探討中國江蘇漢族人群中TLR4基因多態(tài)性與膿毒癥發(fā)生風(fēng)險及嚴(yán)重程度的相關(guān)性，并對陽性關(guān)聯(lián)SNP的生物學(xué)意義進行初步探索。
　　方法與資料：
　　采用病例-對照研究設(shè)計，通過 TLR4基因的連鎖不平衡結(jié)構(gòu)選擇標(biāo)簽SNP(tagging SNP,tagSNP)，應(yīng)用Sequenom MassARRAY SNP檢測技術(shù)對TLR4基因的標(biāo)簽S

3、NP進行基因型分析。采用非條件Logistic回歸模型，對性別、年齡、吸煙、飲酒、APACHEⅡ評分和慢性病狀態(tài)等混雜因素進行校正，并在模型中加入相關(guān)變量的交互項，評估TLR4基因單核苷酸多態(tài)性與膿毒癥的易感性，以及嚴(yán)重膿毒癥、膿毒癥休克、多器官功能障礙綜合征和死亡等膿毒癥繼發(fā)表型的相關(guān)性。針對有統(tǒng)計學(xué)意義的陽性關(guān)聯(lián)SNP，應(yīng)用流式細胞技術(shù)觀察全血LPS刺激前后，單核細胞表面 CD14、TLR4、IL-6R蛋白表達變化規(guī)律，以及 TLR

4、4基因rs11536889 SNP三種不同基因型對LPS刺激的外周全血中單核細胞表面TLR4蛋白表達水平的差異化影響。
　　結(jié)果：
　　本研究在280例膿毒癥病例和224例正常對照樣本中，對TLR4基因所在區(qū)域的15個 tagSNP進行了基因型分析。所有15個 SNP均分型成功，其中 SNP rs10983744的基因型頻率分布不符合Hardy-Weinberg平衡定律。經(jīng)遺傳關(guān)聯(lián)分析，發(fā)現(xiàn)位于TLR4基因3’非翻譯區(qū)的rs

5、11536889 SNP與性別存在交互作用，與膿毒癥的嚴(yán)重程度密切相關(guān)。按男女性別進行樣本分層分析，在男性群體中，攜帶 CC基因型的患者更容易發(fā)生休克（在隱性遺傳模式下：GG+GC vs. CC， OR=9.36，95％CI=1.26-69.83），并最終導(dǎo)致多器官功能障礙（在隱性遺傳模式下：GG+GC vs. CC，OR=19.10，95%CI=2.31-157.66）。
　　功能意義的研究上，利用不同濃度LPS體外刺激全血1-

6、4h后，單核細胞表面CD14蛋白上升、IL-6R下降，且在1小時達到峰值（CD14）和谷底（IL-6R），而單核細胞TLR4蛋白水平變化不明顯（下降趨勢沒有達到統(tǒng)計學(xué)意義），但個體水平間標(biāo)準(zhǔn)差較大。1μg LPS刺激下1h，在對照組和刺激組單核細胞，TLR4 CC、CG、GG三種基因型單核細胞表面TLR4的蛋白表達水平不同，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（p＞0.05）。LPS刺激組不同基因型的單核細胞表面蛋白表達改變?TLR4LPS（TLR4LP

7、S1h-TLR4LPS0h）變化顯著，CC基因型個體外周血單核細胞TLR4表達的降低幅度明顯低于基因型GC和GG的個體的降低幅度（降低幅度熒光強度差值分別為19.2±10.7、45.9±22.2、50.3±20.1，p＜0.05），而對照組不同基因型單核細胞表達改變?TLR4baseline（TLR4baseline1h-TLR4baseline0h）無明顯變化（降低幅度熒光強度差值分別為12.8±9.1、8.6±4.9、9.9±6.0

8、，p＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　本研究結(jié)果顯示：1.在中國人群中TLR4基因rs11536889位點可能與男性膿毒癥病人的嚴(yán)重程度相關(guān)；2.LPS刺激下攜帶不同基因型的個體單核細胞表面TLR4蛋白下降幅度存在明顯差異，CC基因型的個體下降幅度明顯低于其他兩種基因型的個體，提示CC型個體對自身TLR4水平的負反饋調(diào)控能力減弱，容易造成單核細胞表面TLR4蛋白水平相對較高，不能有效調(diào)低炎癥反應(yīng)，從而引發(fā)過度性炎癥反應(yīng)，誘發(fā)更