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1、目的:通過檢測(cè)水溶性 CuInS2-ZnS-AFP熒光探針對(duì)肝癌細(xì)胞株(Hep-G2)的毒性,及其生物相容性,綜合評(píng)估其用于肝癌研究的可能性。
方法:免疫組化方法證實(shí)肝癌細(xì)胞株 Hep-G2可表達(dá) AFP抗原后,選取 AFP作為靶向抗原。制備水溶性量子點(diǎn) CuInS2-ZnS,檢測(cè)其光學(xué)性能、符合生物學(xué)熒光要求后,偶聯(lián)抗 AFP抗體,成為可與 AFP抗原相結(jié)合的、具有靶向性的量子點(diǎn)熒光探針CuInS2-ZnS-AFP。用MTT
2、法和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)該探針對(duì)肝癌細(xì)胞株Hep-G2的增殖抑制及促凋亡作用,驗(yàn)證該探針的生物毒性。將 CuInS2-ZnS量子點(diǎn)與Hep-G2共培養(yǎng)的方法觀察細(xì)胞形態(tài),并用量子點(diǎn)探針 CuInS2-ZnS-AFP對(duì) Hep-G2細(xì)胞株進(jìn)行標(biāo)記顯色,驗(yàn)證其生物相容性。
結(jié)果:實(shí)驗(yàn)通過免疫組化法證實(shí)了Hep-G2細(xì)胞漿大量表達(dá)AFP抗原。量子點(diǎn)光學(xué)性能測(cè)試表明 CuInS2-ZnS量子點(diǎn)的有合適的 Stokes’頻移,適合用于細(xì)胞標(biāo)記
3、。MTT實(shí)驗(yàn)表明 CuInS2-ZnS-AFP熒光探針對(duì) Hep-G2細(xì)胞的毒性很小,標(biāo)記濃度(0.24mg/ml)下24h細(xì)胞存活率大于90%,此條件下的CdTe-ZnS-AFP量子點(diǎn)探針的細(xì)胞存活率約70%。CuInS2-ZnS-AFP組低濃度(<20%)下抑制率與時(shí)間無統(tǒng)計(jì)學(xué)關(guān)系(P>0.05),中高濃度下抑制率與孵育時(shí)間和探針濃度呈正相關(guān), CdTe-ZnS-AFP組抑制率與孵育時(shí)間和探針濃度呈時(shí)間-效應(yīng)(P<0.05)和劑量-
4、效應(yīng)(P<0.05)。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)標(biāo)記濃度的探針與 Hep-G2細(xì)胞共培養(yǎng)2h、6h、24h、48h和72h后的細(xì)胞凋亡率,數(shù)據(jù)與 MTT結(jié)果基本一致。CuInS2-ZnS量子點(diǎn)與 Hep-G2共培養(yǎng)后細(xì)胞無明顯形態(tài)學(xué)改變,細(xì)胞標(biāo)記實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)紫外光激發(fā)下 CuInS2-ZnS-AFP熒光探針在 Hep-G2細(xì)胞漿內(nèi)發(fā)射出很強(qiáng)的黃色熒光,即與CuInS2-ZnS量子點(diǎn)連接后所得探針保留了量子點(diǎn)獨(dú)特的光學(xué)性能。
結(jié)論:(1)本實(shí)驗(yàn)
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