1、目的：對于膀胱癌的治療目前仍以手術(shù)、放療、化療為主；此外，還包括輔助性化療以提高腫瘤的治療效果。盡管如此，但是膀胱癌仍有較高的的復(fù)發(fā)率。新型膀胱癌特異性溶瘤腺病毒的研究已成為當(dāng)代膀胱癌生物治療研究的熱點，它可以在膀胱腫瘤細胞內(nèi)特異性的增殖并且殺滅腫瘤腫瘤細胞，是腫瘤靶向治療的重要方法。目前對溶瘤腺病毒的療效已經(jīng)進行了相應(yīng)的研究，但是安全性和毒性仍存在較大的爭議，并且已報道的溶瘤腺病毒的毒性主要集中于急性毒性實驗和長期毒性實驗，對于溶瘤腺

2、病毒的生殖毒性的研究仍未見報道。因此本課題將我們實驗室構(gòu)建的膀胱癌特異性溶瘤腺病毒 Ad-PSCAE-U PⅡ-E1A(APU-E1A)進行一般生殖毒性實驗和致畸毒性實驗；評價胎鼠的骨骼結(jié)構(gòu)，并且觀察F1代的實質(zhì)內(nèi)臟組織的發(fā)育情況。為溶瘤腺病毒的安全性提供基本的數(shù)據(jù)支持。
　　方法：我們委托北京五加和公司將我們實驗室已經(jīng)構(gòu)建完成的膀胱癌特異性溶瘤腺病毒 Ad-PSCAE-UPⅡ-E1A(APU-E1A)進行擴增、純化和鑒定。小鼠購

3、買與甘肅中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗室。整個安全性評價體系分為三部分：急性毒性實驗，一般生殖毒和致畸毒性實驗。急性毒性是將擴增的溶瘤腺病毒以腹腔給藥的方式一次性注射進入小鼠的腹腔，觀察小鼠的行為改變和體重的變化，14天后處死小鼠檢測小鼠血液中淋巴細胞和血小板以及肝臟谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）水平的測定；病理組織的切片進行HE染色后,觀察溶瘤腺病毒對于各組織臟器的鏡下病理改變。一般生殖毒性實驗是指將小鼠給藥之后，進行合籠交配，觀察胎

4、鼠和子代小鼠的發(fā)育情況；首先處理雄性小鼠：先將雄性小鼠連續(xù)給藥28天，給藥方式為肌肉注射，給藥的時間為隔日給藥；雌性小鼠，在雄性小鼠給藥兩周后開始給藥，連續(xù)給藥14天，給藥方式為肌肉注射，給藥時間為隔日給藥；完成給藥后將雌雄小鼠合籠交配。交配成功后將受孕小鼠分為兩部分，一部分在受孕16天后進行安樂死，然后取出胎鼠，去除內(nèi)臟和皮膚進行骨骼染色，觀察骨骼改變。另一部分自然分娩，將出生后的小鼠飼養(yǎng)30天后處死，測定小鼠的體重變化，并且對各組織

5、進行病理切片，觀察組織在在鏡下改變。致畸毒性實給藥方案：將交配后的雌性小鼠在第六天開始給藥，隔日給藥一次，直到受孕后第14天；一部分在第16天后安樂死，取出胎鼠，觀察胚胎骨骼結(jié)構(gòu)的變化，另一部分自然分娩后，自然生長30天，觀察生長發(fā)育過程中的改變，然后將小鼠處死，將各組織制作成病理切片，觀察進行HE染色后的鏡下改變。
　　結(jié)果：在小鼠的急性毒性實驗中，小鼠出現(xiàn)扭體等腹痛的體征，實驗組小鼠的體重增加快于對照組，具有統(tǒng)計學(xué)的差異；另外

6、在小鼠的解剖發(fā)現(xiàn)實驗組小鼠的的腹腔出現(xiàn)血性腹水，肝臟呈現(xiàn)出亞急性重型肝炎的表現(xiàn)，鏡下觀察小鼠的肝臟組織呈現(xiàn)出嚴(yán)重的肝組織壞死，正常的肝小葉結(jié)構(gòu)遭到破壞；其他組織臟器均無明顯的變化。在一般生殖毒實驗的研究中發(fā)現(xiàn)，對照組與低劑量組、中劑量組、高劑量組之間比較，各組之間胎鼠的窩重和胎盤重均無明顯的改變，胎鼠的體長和尾長之間的差異也無統(tǒng)計學(xué)的意義，小鼠的骨骼染色均顯示正常，在子一代的發(fā)育過程之中，各組之間小鼠的體重改變有統(tǒng)計學(xué)的意義，但是這種差

7、異通過小鼠的體重增長變化的曲線發(fā)現(xiàn)差異不大，這可能是由于個體之間的差異和受孕時雌鼠的體重不同造成的。在小鼠的致畸毒性實驗的過程之中，低中高三個劑量組與對照組之間進行比較，胎鼠的胎盤和窩重各組之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義，在胎鼠的體長和尾長之間的差異也無統(tǒng)計學(xué)的意義，在子一代的發(fā)育過程之中，小鼠的體重增加有統(tǒng)計學(xué)的意義，但是從小鼠的生長曲線上看，這種差異不大，由于小鼠的各組之間生長曲線顯示各組之間的差異不大，所以不認(rèn)為這是由于溶瘤腺病毒所引起。

8、
　　結(jié)論：所構(gòu)建的膀胱組織特異性溶瘤腺病毒（（Ad-PSCAE-UPII-E1A-AR(APU-E1A-AR)在急性毒性試驗中，可能具有較為嚴(yán)重的肝臟毒性，肝臟可能為溶瘤腺病毒的靶器官；另外在給予治療劑量的100倍時，無小鼠死亡，說明此種腺病毒的安全性還是值得肯定的。在小鼠的一般生殖毒性試驗和致畸毒性實驗中，各組織間的差異不是很大，無明顯的改變，因此，認(rèn)為我們所構(gòu)建的溶瘤腺病毒對于小鼠的生殖系統(tǒng)的影響不大，是一種相對較為安全的腫