堿性蛋白酶產(chǎn)生條件和酶學(xué)性質(zhì)及其基因克隆的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、以本實(shí)驗(yàn)室保存的枯草芽孢桿菌I15為材料，通過單因子實(shí)驗(yàn)法優(yōu)化了其發(fā)酵產(chǎn)堿性蛋白酶的培養(yǎng)基和發(fā)酵條件，福林法測定酶活性，并研究了堿性蛋白酶的部分酶學(xué)性質(zhì)。研究結(jié)果顯示：玉米淀粉1.2％和豆餅粉0.3％可作為最適經(jīng)濟(jì)碳氮源。培養(yǎng)基初始pH8.0,37℃，16h達(dá)到最大產(chǎn)酶量3384U/mL;堿性蛋白酶的最適反應(yīng)pH和溫度分別是pH8.0和65℃，該酶具有較好的pH和熱穩(wěn)定性，pH11時(shí)仍有最大酶活性的90％，在pH7～11保存24h仍然能

2、保持至少82％的酶活。40-50℃保存3h，酶活性幾乎沒下降。70℃條件下半衰期為2.5h。Ca2+能有效激活酶活力，PMSF幾乎完全抑制酶活性，推測該酶應(yīng)屬于絲氨酸堿性蛋白酶，該酶對表面活性劑和溫和型去垢劑具有超強(qiáng)的耐受性。
　　 另外，我們用PCR法從枯草芽孢桿菌I15總DNA中克隆了堿性蛋白酶基因(sap)，基因在GenBank中的登錄號為GQ339614.1。比對了堿性蛋白酶和其他已經(jīng)報(bào)道的絲氨酸堿性蛋白酶的氨基酸序列，

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