1、目的:
　　糖尿病是一組由多種病因引起的以高血糖為特征的代謝性疾病。糖尿病患者體內(nèi)長期的高血糖最終會導致一系列大血管和微血管病變并引發(fā)并發(fā)癥，如糖尿病心肌病、糖尿病視網(wǎng)膜病、糖尿病周圍神經(jīng)病、糖尿病足等，這些并發(fā)癥嚴重地影響患者的生活質(zhì)量，并與糖尿病較高的致殘率和致死率有關(guān)。目前對于糖尿病的治療，主要目標是控制血糖和改善胰島素不足和胰島素抵抗，但這些治療手段并不能有效地阻止糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生，臨床上仍缺乏針對糖尿病并發(fā)癥的特效治療

2、方式。
　　間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cell，MSC)移植是近年來涌現(xiàn)出的治療糖尿病并發(fā)癥的新方式。MSC是一類幾乎存在于機體所有組織和器官中的多能干細胞，他具有強大的增殖能力和向中胚層組織分化的能力，在調(diào)節(jié)機體免疫應答反應和修復受損組織中都發(fā)揮了非常重要的作用。大量研究顯示，對多種糖尿病大血管和微血管并發(fā)癥應用MSC移植治療都取得了很好的治療效果，然而也有一部分糖尿病患者對MSC移植并不敏感，治療效果不佳

3、。且有研究發(fā)現(xiàn)，移植到糖尿病患者體內(nèi)的MSC極易死亡，其機制仍不清楚。另外，較同齡健康人相比，晚期糖尿病患者的內(nèi)源性MSC的數(shù)量和質(zhì)量也呈下降趨勢。
　　研究證實，糖尿病患者體內(nèi)持續(xù)性的高血糖通過促進血管內(nèi)皮細胞發(fā)生鈣超載和氧化應激等一系列病理改變，促使血管內(nèi)皮細胞凋亡增加，增殖和遷移能力下降導致血管內(nèi)皮功能紊亂是糖尿病血管病變所致各種并發(fā)癥的主要原因。而前期實驗發(fā)現(xiàn)高糖不僅不抑制MSC的生長，反而促進其增殖。所以，推測高糖首先誘

4、導內(nèi)皮細胞損傷，并釋放相關(guān)因子后繼發(fā)性導致了內(nèi)源性或者外源性MSC在糖尿病患者體內(nèi)的死亡。
　　為此，本研究旨在探討體外高糖誘發(fā)內(nèi)皮細胞損傷而繼發(fā)性影響MSC增殖和凋亡的效應及其分子機制。為尋找增強MSC移植治療糖尿病并發(fā)癥以及保護糖尿病患者內(nèi)源性MSC的新策略提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　通過酶消化法體外分離培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞、組織塊貼壁法分離培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細胞，并對其表面標志和功能進行鑒定。檢測高糖對內(nèi)皮細

5、胞功能的影響，建立高糖損傷內(nèi)皮細胞的模型，并收集內(nèi)皮細胞條件培養(yǎng)基。然后用收集到的內(nèi)皮細胞條件培養(yǎng)基刺激MSC，檢測其對MSC增殖和凋亡的影響，并通過Western blot鑒定刺激后的MSC中相關(guān)蛋白表達水平的變化，鈣離子染色檢測刺激后的MSC中鈣離子濃度的變化。
　　結(jié)果:
　　1.成功的在體外分離培養(yǎng)了人臍靜脈內(nèi)皮細胞和人臍帶間充質(zhì)干細胞，其表面標志和功能特點符合相應標準。
　　2.成功構(gòu)建了高糖誘導內(nèi)皮細胞損傷

6、的模型，流式細胞術(shù)及體外成血管實驗發(fā)現(xiàn)高糖能誘導內(nèi)皮細胞的凋亡，損傷其血管生成能力。并成功收集到不同培養(yǎng)條件的內(nèi)皮細胞條件培養(yǎng)基。
　　3.細胞實時監(jiān)測和流式細胞術(shù)檢測結(jié)果表明高糖刺激的內(nèi)皮細胞條件培養(yǎng)基能抑制MSC的增殖，并促進其凋亡;Western blot表明MSC的凋亡與凋亡相關(guān)蛋白(Bax、Bcl-2、Cl-Caspase-3)的表達水平變化有關(guān);鈣離了染色提示MSC的凋亡與鈣離子內(nèi)流導致的鈣超載有關(guān)。
　　結(jié)論: