1、目的：本研究通過增強型綠色熒光蛋白與 p53α真核表達載體構(gòu)建和表達，觀察p53α對人肺腺癌細胞株H1299化療敏感性的影響，為化療和基因聯(lián)合治療肺腺癌提供了實驗基礎(chǔ)。
　　方法：通過 RT-PCR法擴增人肺腺癌細胞 A549中p53α基因，瓊脂糖凝膠回收、純化后產(chǎn)物與克隆載體 pMD18-T連接、轉(zhuǎn)化；將重組克隆載體與真核表達質(zhì)粒 pEGFP-N1分別用EcoRI和BamHI酶切，連接、轉(zhuǎn)化、測序等制備質(zhì)粒載體pEGFP-p53

2、α。脂質(zhì)體介導(dǎo)將p53α轉(zhuǎn)染H1299細胞，經(jīng)G418篩選獲得穩(wěn)定表達的p53α陽性細胞克隆并擴增培養(yǎng)。RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染細胞中p53α基因表達；Western Blot、免疫細胞化學(xué)檢測轉(zhuǎn)染細胞中TP53蛋白表達；采用 MTT實驗和平板克隆實驗檢測 CDDP、5-FU處理前后穩(wěn)定細胞株的藥物敏感性變化；DAPI染色法檢測化療藥CDDP、5-FU作用前后轉(zhuǎn)染細胞凋亡的變化。
　　結(jié)果：轉(zhuǎn)染p53α的H1299細胞穩(wěn)定表達TP53

3、蛋白。MTT實驗提示H1299/pEGFP-p53α細胞存活率顯著低于H1299和H1299/ pEGFP-N1細胞（P<0.05），CDDP、5-FU的IC50分別下降了35.7％和45.5%。CDDP、5-FU化療后，H1299/ pEGFP-p53α細胞克隆形成率與對照組相比，前者的細胞克隆率顯著下降，有統(tǒng)計學(xué)顯著性（P<0.05）。DAPI染色法提示H1299/pEGFP-p53α比H1299和H1299/pEGFP-N1的細胞