1、目的:
　　尖銳濕疣(condyloma acuminatum，CA)是由人乳頭瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)感染所引起的性傳播疾病，近年來(lái)的發(fā)病率居高不下，目前在我國(guó)性傳播疾病中位居第二。典型的CA診斷并不困難，但是臨床上仍有一些臨床表現(xiàn)不典型的CA，即使皮損行組織病理活檢表現(xiàn)仍不典型，給明確診斷和進(jìn)一步治療帶來(lái)了一定困難。尋找高效簡(jiǎn)便易行的HPV檢測(cè)手段將有助于CA的診斷和治療。本文采用自行制備的人乳

2、頭瘤病毒HPV6b，11型E7蛋白多克隆抗體作為特異性抗體，通過(guò)免疫組化方法檢測(cè)臨床疑似尖銳濕疣皮損活檢標(biāo)本中的HPV6bE7及11E7蛋白的表達(dá)，回顧性分析臨床疑似尖銳濕疣的石蠟標(biāo)本的HPV6b、11型檢出率，以及與組織病理診斷的符合率。旨在探討該二個(gè)蛋白多克隆抗體應(yīng)用于疑似尖銳濕疣診斷的可行性及優(yōu)勢(shì)，并試圖闡述其應(yīng)用前景。
　　方法:
　　共收集2011年1月-2014年8月期間于浙江大學(xué)附屬邵逸夫醫(yī)院皮膚科門(mén)診就診的、

3、臨床表現(xiàn)為外生殖器部位不典型贅生物的手術(shù)活檢標(biāo)本41例?；仡櫡治龌颊呋拘畔⑷缒挲g、性別以及臨床病損、組織病理學(xué)特點(diǎn)。
　　以自行制備的HPV6b，11型E7蛋白兔多克隆抗體作為特異性抗體的免疫組化法檢測(cè)病損組織中的HPV6bE7及11E7蛋白的表達(dá)，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞的著色強(qiáng)度以及陽(yáng)性細(xì)胞所占的百分?jǐn)?shù)綜合評(píng)定，進(jìn)行半定量評(píng)級(jí)。統(tǒng)計(jì)分析該兩抗體對(duì)臨床表現(xiàn)不典型尖銳濕疣標(biāo)本的HPV病毒的陽(yáng)性檢測(cè)率以及與臨床診斷和病理診斷的符合情況。統(tǒng)計(jì)分

4、析表皮各層中陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞分布，t檢驗(yàn)分析表皮備層中陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞密度的差異。
　　結(jié)果:
　　回顧分析了41例臨床疑似尖銳濕疣的皮損進(jìn)行的常規(guī)組織病理檢查，其中29例皮損可見(jiàn)典型的CA病理改變，余下12例皮損的組織病理表現(xiàn)則缺乏典型CA的改變，僅表現(xiàn)為乳頭瘤樣增生或棘層肥厚。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，41例皮損標(biāo)本中，HPV6bE7蛋白陽(yáng)性表達(dá)為34例(即HPV6b型陽(yáng)性感染率82.93％)，HPV11E7蛋白陽(yáng)性表達(dá)為27例

5、(即HPV11型陽(yáng)性感染率65.85％)，HPV6bE7和HPV11E7蛋白總陽(yáng)性表達(dá)38例（即HPV6b和11型總陽(yáng)性感染率為92.68％）。其中兩E7蛋白雙陽(yáng)性表達(dá)的皮損組織為23例(即HPV6b型和11型雙陽(yáng)性率為56.10％，提示存在該兩型病毒合并感染的病例占56.10％)，兩E7蛋白表達(dá)均陰性的皮損共3例（即該兩型HPV感染雙陰性率7.32％）。其中陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞主要分布于棘層及基底層，在顆粒層相對(duì)較少。
　　在12例組織

6、病理無(wú)典型CA表現(xiàn)的皮損中，HPV6bE7蛋白陽(yáng)性表達(dá)占10例(即提示HPV6b陽(yáng)性感染率83.33％)，HPV11E7蛋白陽(yáng)性表達(dá)6例（即HPV11陽(yáng)性感染率為50.00％）;兩E7蛋白雙陽(yáng)性表達(dá)5例(提示該兩型病毒合并感染的病例占41.67％)，兩E7蛋白總陽(yáng)性表達(dá)11例(即HPV6b型和11型總陽(yáng)性感染率為91.67％)，雙陰性表達(dá)1例（即該兩型HPV感染陰性率為8.33％）。
　　討論:
　　HPV6b/11E7蛋白

7、多克隆抗體作為特異性抗體對(duì)臨床可疑CA標(biāo)本進(jìn)行的免疫組化染色檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，HPV6b與11型的陽(yáng)性感染率分別為82.93％和65.85％，，與PCR方法檢測(cè)HPV的陽(yáng)性率基本相符。兩個(gè)HPV的E7蛋白表達(dá)總陽(yáng)性率為92.68％，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，PCR方法檢測(cè)結(jié)果表明尖銳濕疣中超過(guò)90％是由HPV6型和HPV11型感染引起的，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與之亦符合。
　　41例皮損中，HPV6bE7表達(dá)陽(yáng)性而HPV11E7表達(dá)陰性的皮損有11例，HPV6bE

8、7表達(dá)陰性而HPV11E7表達(dá)陽(yáng)性的皮損則有4例，表明該兩抗體在免疫組化檢測(cè)中沒(méi)有交叉反應(yīng)。綜上可知該二型抗體免疫組化檢測(cè)對(duì)HPV6b/11E7蛋白的檢出率高，敏感性好，特異性強(qiáng)。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞主要分布于棘層及基底層，在顆粒層相對(duì)較少，則考慮與HPV的生活周期有關(guān)。
　　12例組織病理無(wú)典型CA表現(xiàn)的疑似CA標(biāo)本中，僅有1例HPV6bE7及11E7蛋白表達(dá)均為陰性，HPV6bE7及11E7蛋白的總檢出率高達(dá)91.

9、67％。提示在這些臨床表現(xiàn)、病理組織改變均不典型的疑似CA中，亦有90％以上是由HPV6b型和/或HPV11型感染致病的。對(duì)臨床表現(xiàn)及病理組織改變均缺乏典型表現(xiàn)的疑似CA以該方法進(jìn)行檢測(cè)，可確診由該二型HPV感染引起的CA，能顯著提高診斷率。
　　本實(shí)驗(yàn)使用的自行制備的HPV6bE7和11 E7抗體對(duì)臨床疑似尖銳濕疣標(biāo)本的免疫組化染色的陽(yáng)性率顯著高于文獻(xiàn)報(bào)道的HPV L1殼蛋白抗體免疫組化染色法;相較于其他檢測(cè)HPV的分子檢測(cè)手段

10、，免疫組化有著操作簡(jiǎn)便，設(shè)備及實(shí)驗(yàn)室要求低，檢測(cè)所需時(shí)間較短，價(jià)格相對(duì)便宜等優(yōu)勢(shì)。
　　結(jié)論:
　　1.以自行研發(fā)制備的HPV6b，11型E7蛋白多克隆抗體免疫組化法檢測(cè)對(duì)皮損中HPV6bE7/11E7蛋白陽(yáng)性檢出率高，敏感性高，特異性強(qiáng)。
　　2.相較于PCR、DNA印跡雜交、原位雜交技術(shù)等特異性較高的檢測(cè)方法，本方法具有操作簡(jiǎn)便、操作及設(shè)備要求均較低、價(jià)格經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)。
　　3.對(duì)于通過(guò)組織病理活檢仍不能明確診