1、大多數(shù)生物分子本身沒有熒光或熒光較弱，直接檢測靈敏度較低，為使之高靈敏的檢出，人們常用熒光染料或熒光探針與待測物進行標記或反應，生成具有強熒光的共價或非共價結合的物質，使檢出限大大降低。熒光探針技術在分析化學，特別是生物分析中有較廣泛的應用。利用熒光分析法對生物體系中蛋白質、核酸、金屬離子及自由基的分析測定已引起人們的廣泛重視。
　　 生物體中的巰基化合物(包括半胱氨酸、高半胱氨酸和還原型谷胱甘肽等)在調節(jié)體內氧化還原動態(tài)平衡上

2、起了非常重要的作用。血液中巰基化合物的缺乏可引發(fā)多種疾病，例如：艾滋病、心臟病、阿爾茨海默氏癥和心血管疾病等。谷胱甘肽硫轉移酶(Glutathione S-transferase，GST)作為Ⅱ相解毒代謝酶，其主要功能是催化某些內源性或外來有害物質的親電子基團與還原型谷胱甘肽的巰基結合，增加其疏水性使其易于排出體外，從而達到解毒的目的。熒光分析法具有靈敏度高、選擇性好及可用于原位分析等優(yōu)點而在分子檢測中受到人們的廣泛關注。因此設計合成具

3、有選擇性好、靈敏度高、可用于實時檢測巰基化合物和GST活性的熒光探針具有非常重要的意義。本文分別以香豆素、熒光素為母體設計合成對巰基化合物和GST具有有專一響應的熒光探針。論文分五章，分別包括以下內容：
　　 第一章緒論。主要介紹了含親電基團的熒光探針檢測生物體系中巰基化合物及還原型谷胱甘肽硫轉移酶活性的研究進展，并提出本論文的研究設想。
　　 第二章4-甲基傘形酮類熒光探針檢測巰基化合物的應用研究。本文設計合成了一種檢

4、測巰基化合物的新型熒光探針1，該探針是由4-甲基傘形酮與2，4，6三硝基氯苯一步反應完成?；衔?是一種無熒光的物質，在pH=7.4的水溶液反應體系中，其與巰基分子發(fā)生親核取代反應，使化合物1中硝基苯環(huán)上的C-O鍵斷裂釋放出強熒光物質4-甲基傘形酮，導致反應體系熒光強度顯著增強?；谏鲜鲈恚菊陆⒘艘环N檢測人血清中生物巰基的熒光分析法。
　　 第三章測定巰基化合物的熒光素類熒光探針的研究。本文分別以2，4，6三硝基氯苯、2，

5、4-二硝基氯苯和對硝基氯苯作為羥基的保護基團合成了化合物3、化合物4和化合物5三種弱熒光的物質。在生理pH條件下，化合物3可與巰基分子發(fā)生親核取代反應，使化合物3中硝基苯環(huán)上的C-O鍵斷裂釋放出強熒光物質熒光素，導致反應體系熒光強度顯著增強。與化合物3相比，化合物4與巰基分子發(fā)生親核取代反應的活性顯著降低，而化合物5不能與巰基分子發(fā)生親核取代反應。我們以化合物3作為檢測巰基化合物的熒光探針，其最大發(fā)射波長513 nm(可見區(qū))。基于上述

6、原理，本章建立了一種測定生物巰基的熒光分析法。實驗結果表明，該方法選擇性好，靈敏度高。
　　 第四章一種檢測谷胱甘肽硫轉移酶活性的熒光素類熒光探針。文獻報道，還原型谷胱甘肽硫轉移酶(GST)可有效增強還原型谷胱甘肽(GSH)的反應活性。由于第三章所合成的化合物4與巰基分子發(fā)生親核取代反應的活性較低，但在GST的催化下，GSH可有效進攻化合物4中與硝基苯環(huán)相連的醚鍵的碳位，釋放出強熒光物質熒光素，導致體系熒光強度增加。在相同的實驗

7、條件下，GSH不能與化合物5發(fā)生親核取代反應。因此我們以第三章合成的化合物4作為檢測GST活性的熒光探針，建立了一種測定谷胱甘肽硫轉移酶活性的新型熒光分析法。
　　 第五章以香豆素為母體的Zn2+熒光傳感器的合成及應用研究。本文以香豆素為母體設計合成一種檢測Zn2+的化學傳感器6?；衔?本身是一種弱熒光物質，在30％的乙醇水溶液中，其與Zn2+形成1:1的配合物。由于Zn2+與化合物6之間的配合作用，束縛了化合物6分子中N原子