1、The Mab-21基因——從秀麗隱桿線蟲中被最早鑒定出來的一個高度保守的基因，目前已鑒定出的Mab-21基因有兩個:Mab-2111和Mab-2112。在脊椎動物中，這兩個基因編碼的氨基酸序列存在90％以上的同源性，因此二者的功能也存在冗余和交叉現象。早期的研究發(fā)現Mab2112基因調控著原腸胚、神經管的形成，在調節(jié)眼睛分化中也起著非常重要的作用。The Mab-2111的表達依賴于另一個重要的調節(jié)發(fā)育的轉錄因子——Pax6。Foxe

2、3是一個調節(jié)晶狀體發(fā)育的重要轉錄因子。在小鼠中敲除Mab-2111基因將使Foxe3基因表達水平顯著下調。本論文所關注的Mab-2112基因在脊椎動物發(fā)育早期都有表達。Mab-2112基因還作為負性調節(jié)因子，在調節(jié)Rx2以及視網膜生成過程中起著舉足輕重、不可替代的重要作用。
　　 本課題以HLE細胞系作為實驗材料，研究Mab-2112對HLE細胞凋亡的影響，主要實驗方法及結果如下:
　　 1.用OA分別處理HLE-vec

3、tor和HLE-12兩種細胞24小時、48小時。用血球計數器進行細胞計數，并估算出處理24小時、48小時的凋亡率。HLE-vector細胞在處理24小時時凋亡率為約20％，而HLE-12只有10％左右。待處理到48小時HLE-vector達到60％，而HLE-12大概維持在30％。由此可以看到，雖然在OA處理后，HLE-vector細胞和HLE-12細胞的數目都有所減少，但HLE-L2細胞的凋亡速率一直低于HLE-vector細胞。

4、r>　　 2.對處理0小時、3小時、6小時的兩種細胞進行Hoechst染色，在熒光顯微鏡中可以觀察到，OA處理HLE-vector細胞6h時，凋亡比HLE-12較明顯，說明HLE-12細胞相比于空載體細胞系HLE-vector凋亡延遲。流式結果顯示，到處理48小時時HLE-vector細胞已經基本都處于凋亡的狀態(tài)，而HLE-12很多細胞雖然也呈現凋亡的狀態(tài)，但是仍有相當一部分細胞存活。這在一定程度上，反應出了Mab2112對細胞抗凋亡

5、的重要作用。
　　 3.利用RT-PCR技術和western blot技術，對內源性凋亡途徑相關基因Bak的RNA水平和蛋白水平的表達進行了檢測。通過RT-PCR方法檢測RNA表達水平結果顯示:在對照系中，從6小時開始，Bak的RNA水平即已開始增加，24小時時表達量已經非常高;而過表達系中Bak的RNA水平卻一直維持比較低的水平。這表明，Mab2112基因可以延遲Bak mRNA水平的表達。Western blot檢測蛋白水平

6、結果顯示:在HLE-12細胞中，OA處理后，Bak急劇下調，且一直維持在很低的表達水平;而在HLE-vector細胞中，Bak的表達一直維持很高的水平，在處理24小時時，表達水平達到最高。Western bolt結果表現出在蛋白水平上，Mab2112對Bak蛋白表達的強烈抑制作用。
　　 綜上所述，Mab2112基因可以抑制Bak的表達，而Bak蛋白在內源性細胞凋亡過程中起到非常重要的作用，可以通過穿過線粒體外膜、改變其線粒體通