1、Wnt信號(hào)通路是生物體內(nèi)最重要的信號(hào)傳導(dǎo)途徑之一。Wnt和成體中控制細(xì)胞的增殖、分化以及形態(tài)發(fā)生。R-spondin(Rspo)是一個(gè)近年來新發(fā)現(xiàn)的蛋白家族,由4個(gè)分泌型蛋白組成(Rspo1-4)。研究報(bào)道Rspo蛋白在脊椎動(dòng)物的發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用。Rspo蛋白的作用與經(jīng)典Wnt信號(hào)通路的配體類似,都是通過激活β-catenin發(fā)揮其生物學(xué)活性。目前鮮有關(guān)于硬骨魚Rspo蛋白結(jié)構(gòu)與功能的報(bào)道。因此本研究克隆了斑馬魚Rspo3,并對(duì)其

2、結(jié)構(gòu)與功能進(jìn)行了初步研究。
　　通過分析斑馬魚Rspo3的蛋白結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn),與現(xiàn)已報(bào)道的Rspo包含2個(gè)furin-like結(jié)構(gòu)域的蛋白結(jié)構(gòu)不同,斑馬魚Rspo3蛋白包含3個(gè)furin-like結(jié)構(gòu)域。為確定這種特殊的蛋白結(jié)構(gòu)是否在硬骨魚Rspo基因中普遍存在,本研究預(yù)測得到青鳉、河豚和三棘刺魚的Rspo3,并且發(fā)現(xiàn)這三種硬骨魚的Rspo3同樣具有3個(gè)furin-like結(jié)構(gòu)域。Rspo3 mRNA在斑馬魚早期胚胎發(fā)育的各個(gè)時(shí)期都有表

3、達(dá)。在12hpf(hours post fertilization)之前隨著胚胎的發(fā)育,Rspo3表達(dá)量逐漸升高;12hpf之后維持在相對(duì)穩(wěn)定的較高表達(dá)水平。原位雜交結(jié)果顯示Rspo3 mRNA在多個(gè)組織中表達(dá),在神經(jīng)系統(tǒng)以及骨組織中表達(dá)水平較高。在斑馬魚胚胎中過表達(dá)Rspo3 mRNA導(dǎo)致胚胎嚴(yán)重畸形,包括頭部增大、軀干縮短、尾部卷曲等。過表達(dá)Rspo3導(dǎo)致的神經(jīng)胚層前部化、背部神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育異常以及抑制胚胎后部結(jié)構(gòu)的發(fā)育等表型類似于之

4、前報(bào)道的敲降了Wnt3a和/或Wnt8的胚胎表型,還與過表達(dá)了dkkl和Frzb的胚胎表型一致。將Rspo3 mRNA分別與Wnt3a、Writ8.1mRNA共注射后發(fā)現(xiàn),Rspo3的過表達(dá)可以挽救由Wnt3a或Wnt8.1過表達(dá)引起的A/P軸增長的表型,表明Rspo3可以抑制經(jīng)典Wnt信號(hào)通路。將Rspo3 mRNA與dkkl mRNA共注射,發(fā)現(xiàn)共注射Rspo3與dkkl可以促進(jìn)dkkl過表達(dá)引起的背部化表型(頭部增大、A/P軸變短