1、目的:
　　隨著全球經(jīng)濟(jì)的飛速發(fā)展，代謝性疾病，如非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholicfatty liver disease，NAFLD)的患病率日益升高，在普通人群中占20至30％，而在一些代謝紊亂的特殊人群中，如2型糖尿病患者中高達(dá)70％。然而，目前對于NAFLD的診斷和治療手段仍非常局限，對其發(fā)病機(jī)制的理解也停留在“二次打擊”學(xué)說。因此，本研究擬從NAFLD研究領(lǐng)域三大熱點(diǎn)，Ω-3不飽和脂肪酸、長鏈非編碼RNA以及

2、血清補(bǔ)體C3入手，以期進(jìn)一步明確NAFLD的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，并為其治療找尋新靶點(diǎn)提供新策略。
　　方法:
　　本研究通過高脂飲食喂養(yǎng)C57小鼠構(gòu)建NAFLD動物模型，并采用肝臟組織病理學(xué)檢查及血清甘油三酯測定對建模情況進(jìn)行評估;用混合游離脂肪酸處理正常人肝細(xì)胞株構(gòu)建NAFLD細(xì)胞模型，采用油紅O染色進(jìn)行鑒定。通過油紅O染色、流式細(xì)胞儀等技術(shù)檢測不同藥物處理對混合游離脂肪酸影響肝細(xì)胞以及自噬缺陷細(xì)胞的脂質(zhì)沉積的作用;采用蛋白免疫

3、印跡和實(shí)時熒光定量技術(shù)檢測不同處理后細(xì)胞內(nèi)相關(guān)效應(yīng)蛋白的表達(dá);采用免疫熒光染色和蛋白免疫印跡檢測細(xì)胞自噬水平。在芯片研究中，通過對NAFLD小鼠模型肝組織RNA進(jìn)行提取、純化、雜交及掃描，所用芯片為Agilent小鼠表達(dá)譜芯片。為驗(yàn)證芯片數(shù)據(jù)的可靠性，選取部分lncRNA和mRNA進(jìn)行實(shí)時熒光定量實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。在橫斷面研究中，對研究人群采集基本信息，收集空腹血樣本進(jìn)行血清學(xué)檢測，肝臟脂變采用超聲進(jìn)行診斷，通過logistic回歸分析不同因素

4、與NAFLD發(fā)病的相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　　本研究發(fā)現(xiàn)NAFLD細(xì)胞模型中，隨造模時間延長，胞內(nèi)脂質(zhì)積累加重，細(xì)胞凋亡增多;而藥物誘導(dǎo)自噬或Ω-3不飽和脂肪酸處理后，脂變減輕，凋亡減少;相反的，在自噬缺陷細(xì)胞或藥物處理抑制細(xì)胞自噬時，脂交加重，凋亡增多;Ω-3不飽和脂肪酸能夠通過硬脂?；?輔酶A脫氫酶誘導(dǎo)自噬。
　　在NAFLD小鼠肝臟表達(dá)譜芯片分析中發(fā)現(xiàn)，266條mRNA及291條lncRNA表達(dá)發(fā)生改變;進(jìn)一步生物

5、信息學(xué)分析表明，發(fā)生改變等的RNA功能主要集中在“花生四烯酸代謝”、“生物周期”、“亞油酸代謝”、“PPAR信號通路”、“鞘脂類代謝”、“甾體類生物合成”和“色/酪氨酸代謝”等方面。
　　在對中國人群的橫斷面研究發(fā)現(xiàn)，NAFLD患者血清補(bǔ)體C3水平升高，且C3與人群中NAFLD疾病患病率及疾病程度呈正相關(guān);C3濃度與NAFLD的正相關(guān)關(guān)系獨(dú)立于年齡、性別、體重指數(shù)、腰圍、收縮壓/舒張壓、ALT/AST、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶、尿酸及其他