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![棉花酰基輔酶A結(jié)合蛋白家族基因的發(fā)掘及在非生物脅迫抗性中的功能鑒定.pdf_第1頁(yè)](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/10/8/bb74c994-4663-4641-bfac-27a73816e5f1/bb74c994-4663-4641-bfac-27a73816e5f11.gif)
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文檔簡(jiǎn)介
1、棉花是一種重要的經(jīng)濟(jì)作物,影響著人類(lèi)社會(huì)生活的很多方面。發(fā)現(xiàn)、利用、種植和改造棉花是人類(lèi)文明進(jìn)步發(fā)展的一個(gè)重要縮影。但隨著人類(lèi)改造環(huán)境活動(dòng)的加劇,人類(lèi)的生存、生產(chǎn)和生活環(huán)境逐漸惡化,極端天氣和自然條件影響的范圍逐漸擴(kuò)大,也極大挑戰(zhàn)著人類(lèi)的農(nóng)業(yè)生產(chǎn),面對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的輕重取舍,棉花的種植地位逐漸讓位于小麥、水稻等口糧作物,而轉(zhuǎn)移到較為干旱、鹽堿的土地上進(jìn)行生產(chǎn),同時(shí)還伴隨著生產(chǎn)環(huán)境的惡化。因此提升棉花的抗逆性成為當(dāng)前棉花育種的重要目標(biāo)之一,而
2、棉花作為一種抗逆能力較強(qiáng)的作物也具有較大的抗逆育種潛力。
?;o酶A結(jié)合蛋白(Acyl-CoA-binding Protein,ACBP)是一類(lèi)轉(zhuǎn)運(yùn)輔酶A酯類(lèi)和磷脂的重要功能蛋白,其能夠通過(guò)調(diào)節(jié)飽和脂肪酸代謝、?;o酶A庫(kù)、脂肪酸β氧化、囊泡運(yùn)輸?shù)榷喾N細(xì)胞內(nèi)復(fù)雜的生理過(guò)程參與到植物生長(zhǎng)發(fā)育、生物及非生物脅迫響應(yīng)、膜修復(fù)等生理過(guò)程。目前,在許多植物中均對(duì)ACBP蛋白進(jìn)行了基因克隆和功能鑒定,但其在棉花發(fā)育過(guò)程中的生物學(xué)功能尚未有
3、效鑒定。
本試驗(yàn)基于陸地棉遺傳標(biāo)準(zhǔn)系TM-1、雷蒙德氏棉和亞洲棉基因組序列信息,通過(guò)系統(tǒng)進(jìn)化和分類(lèi)分析,明確陸地棉中21個(gè)ACBP基因的基本生物學(xué)信息。通過(guò)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)和qRT-PCR表達(dá)分析初步鑒定出ACBP家族基因中與抗逆相關(guān)的候選基因,通過(guò)VIGS技術(shù)進(jìn)一步驗(yàn)證候選基因在鹽旱脅迫條件下的功能。本研究得到的主要結(jié)果如下:
1、在異源四倍體陸地棉TM-1(AADD)基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選出21條ACBP序列,其中A-亞組
4、含有10個(gè)ACBP成員,分布于5個(gè)染色體上,D-亞組含有10個(gè)ACBP成員,分布于4個(gè)染色體,另外1條尚未確認(rèn)染色體歸屬。分別從二倍體亞洲棉和雷蒙德氏棉獲取了10條和11條ACBP序列,均分布于6條染色體。ACBP家族成員的CDS核苷酸序列長(zhǎng)度從267bp到2109bp不等,對(duì)應(yīng)預(yù)測(cè)的氨基酸序列長(zhǎng)度88到702不等。依據(jù)擬南芥分類(lèi)方法與系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)的聚類(lèi)分析結(jié)果,將陸地棉的21條ACBP氨基酸序列分成Ⅰ~Ⅳ類(lèi)。
2、依據(jù)陸地棉轉(zhuǎn)
5、錄組數(shù)據(jù),對(duì)ACBP家族基因在陸地棉不同組織的表達(dá)特征進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)該家族基因的表達(dá)量差異較大,其成員在不同組織、器官及不同發(fā)育、時(shí)期胚珠、纖維中均有不同程度的表達(dá)。其中GhACBP6亞類(lèi)表達(dá)量最高。結(jié)合四種逆境條件(鹽、干旱、低溫、高溫)下誘導(dǎo)表達(dá)結(jié)果,發(fā)現(xiàn)GhACBP3與GhACBP6兩個(gè)亞類(lèi)基因在陸地棉響應(yīng)逆境過(guò)程中具有較為重要的作用,因此,我們對(duì)這兩個(gè)亞類(lèi)基因進(jìn)一步開(kāi)展激素誘導(dǎo)表達(dá)qRT-PCR驗(yàn)證。結(jié)果證明,GhACBP3亞類(lèi)
6、基因與GhACBP6亞類(lèi)基因響應(yīng)眾多激素誘導(dǎo),可能參與不同激素途徑的響應(yīng)或控制的生理過(guò)程中。
3、通過(guò)VIGS技術(shù)進(jìn)一步驗(yàn)證GhACBP3與GhACBP6兩個(gè)亞類(lèi)基因在高鹽、干旱脅迫條件下的功能。結(jié)果顯示,GhACBP3與GhACBP6亞類(lèi)基因沉默后,干旱處理的陸地棉幼苗出現(xiàn)萎蔫失水現(xiàn)象,鹽處理的植株呈現(xiàn)倒一葉皺縮、葉片出現(xiàn)黃斑、整株生長(zhǎng)滯緩的表型,檢測(cè)顯示脅迫處理組的株高和干物質(zhì)積累量均呈現(xiàn)顯著下降;生理數(shù)據(jù)檢測(cè)顯示,超氧化
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