1、目的:通過體外實驗觀察人參皂苷Rg3、索拉非尼單藥及聯(lián)合對人肝癌細胞株HepG2的作用，從分子生物學水平揭示不同用藥方式對肝細胞癌c-Met/MAPK通路的影響，指導臨床實踐。
　　方法:應用不同濃度的人參皂苷Rg3、索拉非尼單藥及聯(lián)合作用于體外培養(yǎng)的人肝癌細胞株HepG2，采用不同的實驗方法觀察細胞株的生長狀況:(1)通過MTT法觀察不同濃度的人參皂苷Rg3、索拉非尼單藥及聯(lián)合體外對人肝癌細胞株HepG2增殖的影響;用人肝細胞生

2、長因子(HGF)激活c-Met通路，檢測上述藥物對HepG2細胞增殖作用的改變。(2)流式細胞術檢測人參皂苷Rg3、索拉非尼單藥及聯(lián)合體外對人肝癌細胞株HepG2凋亡的影響;用人肝細胞生長因子(HGF)激活c-Met通路，檢測上述藥物對HepG2細胞凋亡率的影響。(3)細胞免疫化學法檢測各組通路相關蛋白c-Met、p-c-Met、Raf、 p-Raf、MEK、p-MEK、ERK、p-ERK的表達情況。(4)細胞免疫印記(Western

3、blotting)法檢測各組c-Met、p-c-Met、Raf、 p-Raf、 MEK、p-MEK、ERK、p-ERK蛋白的表達。
　　結果:(1) MTT結果顯示，人參皂苷Rg3、索拉非尼單藥及聯(lián)合對肝癌HepG2細胞增殖均有明顯的抑制作用，該抑制作用呈現時間、劑量依賴性;兩藥聯(lián)合較單藥有更好的抑制作用，聯(lián)合各組均表現為協(xié)同作用;一定濃度范圍的HGF作用于HepG2細胞后可促進細胞增殖，該作用在一定范圍內呈劑量、時間依賴性;采用

4、對細胞增殖能力影響無統(tǒng)計學意義的低濃度HGF仍會降低索拉非尼組的抑制率，低濃度人參皂苷Rg3聯(lián)合索拉非尼后可再次提高抑制率，逆轉HGF的作用。(2)流式細胞術結果顯示，人參皂苷Rg3、索拉非尼單藥或聯(lián)合對HepG2細胞的凋亡率均有抑制作用，其中兩藥聯(lián)合比單藥有更好的抑制作用，聯(lián)合各組均表現為協(xié)同作用;一定濃度范圍的HGF作用于HepG2細胞后可降低抑制率，采用對細胞增殖能力影響無統(tǒng)計學意義的低濃度HGF仍會降低索拉非尼組的凋亡率，低濃度

5、人參皂苷Rg3聯(lián)合索拉非尼后可以逆轉HGF的作用，提高凋亡率。(3)細胞免疫化學結果顯示，人參皂苷Rg3、索拉非尼單藥或聯(lián)合處理HepG2細胞后，c-Met的表達較對照組并無明顯改變;p-c-Met、MEK、p-MEK、ERK、p-ERK較空白對照組顯著降低，且兩藥聯(lián)用組較單藥組降低更為明顯;HGF激活c-Met通路后，c-Met的表達未見明顯改變，而p-c-Met、MEK、p-MEK、ERK、p-ERK表達趨勢一致，表現為:HGF組比

6、空白對照組升高，索拉非尼+HGF組較單純索拉非尼組升高，索拉非尼+HGF+人參皂苷Rg3組較索拉非尼+HGF組降低。(4)細胞免疫印記(Western blotting)法顯示，人參皂苷Rg3、索拉非尼單藥或聯(lián)合處理HepG2細胞后，c-Met的表達較對照組并無明顯改變;p-c-Met、MEK、p-MEK、ERK、p-ERK較空白對照組顯著降低，且兩藥聯(lián)用組較單藥組降低更為明顯，表現為協(xié)同作用;HGF激活c-Met通路后，c-Met的表

7、達未見明顯改變，而HGF組p-c-Met、MEK、p-MEK、ERK、p-ERK表達較對照組升高;索拉非尼+HGF組p-c-Met、MEK、p-MEK、ERK、p-ERK蛋白表達較單純索拉非尼組升高，索拉非尼+HGF+人參皂苷Rg3組p-c-Met、MEK、p-MEK、ERK、p-ERK蛋白表達量較索拉非尼+HGF組降低。
　　結論:人參皂苷Rg3、索拉非尼單藥及聯(lián)合后能有效抑制人肝癌細胞株HepG2的增殖;低濃度人參皂苷Rg3可

8、以增加HepG2細胞對索拉非尼的敏感性。兩藥單用或聯(lián)合可以降低HepG2細胞p-c-Met、MEK、p-MEK、ERK、p-ERK蛋白表達， HGF可以降低二藥對HepG2細胞p-c-Met、MEK、p-MEK、ERK、p-ERK蛋白表達的抑制作用，人參皂苷Rg3聯(lián)合索拉非尼后p-c-Met、MEK、p-MEK、ERK、p-ERK蛋白表達較索拉非尼單藥組降低，表明人參皂苷Rg3、索拉非尼抑制肝癌細胞增殖的作用以及人參皂苷Rg3增加Hep