1、背景及目的：再生醫(yī)學(xué)是一種細(xì)胞治療途徑，包括組織工程和細(xì)胞移植。它可以用來(lái)再生受損或者缺失的組織，以及治療多種難治的疾病。為了再生人類(lèi)組織替代原先受損的組織，需要約109~1011個(gè)治療細(xì)胞，這些細(xì)胞包括多能干細(xì)胞和體細(xì)胞細(xì)胞。但是,培養(yǎng)中反復(fù)使用胰蛋白酶對(duì)細(xì)胞進(jìn)行消化，這對(duì)細(xì)胞膜蛋白以及細(xì)胞外基質(zhì)都有一定程度的損傷,導(dǎo)致細(xì)胞活力的降低。如果能將一種溫敏材料接枝到平皿或者微球表面，合成一種支持細(xì)胞生長(zhǎng)同時(shí)可以非侵襲性溫敏收獲的溫敏材料，

2、那對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)將有很大的應(yīng)用價(jià)值。異丙基丙烯酰胺(Poly(N-isopropylacrylamide),PNIPAAm)是一個(gè)非常合適的溫度敏感的材料。在細(xì)胞培養(yǎng)箱中，這種材料是疏水性的，細(xì)胞可以在材料表面貼附生長(zhǎng)；當(dāng)溫度降低到20℃，NIPAAm轉(zhuǎn)變成親水性材料，細(xì)胞將會(huì)從材料表面脫落，從而非侵襲地收獲細(xì)胞。
　　方法：溫敏平板：化學(xué)合成PS-NIPAAm共聚物，將PS-NIPAAm共聚物傾倒到PS平板的表面。紅外檢測(cè)NIPAA

3、m接枝情況，接觸角檢測(cè)表面的親疏水性。接種干細(xì)胞檢測(cè)溫敏平板的細(xì)胞貼附和脫附能力，并檢測(cè)收獲干細(xì)胞的活力和分化能力。
　　溫敏微載體：原子轉(zhuǎn)移自由基聚合法(Atom transfer radical polymerization,ATRP)合成溫敏聚苯乙烯微球CMPS-NIPAAm，可逆加成-斷裂鏈轉(zhuǎn)移聚合(Reversible Addition-Fragmentation Chain Transfer Polymerizatio

4、n，RAFT)法合成溫敏葡聚糖微球G-50-NIPAAm。SEM、AFM檢測(cè)微球表面形貌，XPS檢測(cè)微球表面元素含量變化。接種VER O細(xì)胞到溫敏微球上，檢驗(yàn)細(xì)胞的貼附和脫附能力；轉(zhuǎn)瓶中檢測(cè)細(xì)胞在微球上的增殖能力并考察溫敏材料在長(zhǎng)期培養(yǎng)細(xì)胞中脫附率的變化情況。
　　結(jié)果：溫敏平板實(shí)驗(yàn)：紅外光譜法顯示溫敏平板上1550 c m-1和1648 c m-1處有氨基和羰基吸收峰，而普通平板上沒(méi)有，NIPAAm成功接枝到平皿表面。在37℃時(shí)

5、，溫敏平皿的接觸角在75.3°~85.0°范圍內(nèi)，和普通平皿的85.5°接近，都呈現(xiàn)疏水性。但是當(dāng)溫度降到20℃。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，溫敏平板的細(xì)胞貼附率和普通平皿相當(dāng)，細(xì)胞脫附率在60％左右。溫敏收獲的干細(xì)胞也具有明顯的成脂成骨分化能力。
　　溫敏微載體實(shí)驗(yàn)：微球掃描電子顯微鏡檢測(cè)顯示，相比于普通的微球，溫敏微球表面有比較明顯的褶皺。而X-射線光電子能譜檢測(cè)顯示，溫敏材料表面的N元素含量相比未接枝微球有一定增加，這表明NIPAAm接枝成