1、本實驗以K562人慢性髓源白血病細胞為研究對象，研究了生物反應器規(guī)?；囵B(yǎng)K562細胞的基本條件，另外通過MTT法、HE染色、流式細胞術、免疫熒光法和RT-PCR等手段從細胞形態(tài)學的變化、細胞周期、線粒體膜電位的變化、相關周期蛋白、相關凋亡蛋白及其基因的表達等方面探討了硒酸軟骨多糖對K562細胞的誘導凋亡作用及其作用機理。
　　首先，對生物反應器規(guī)模化培養(yǎng)K562細胞的基本條件，即初始密度、培養(yǎng)基pH值和攪拌速度進行了研究，結果表

2、明，K562細胞規(guī)?；囵B(yǎng)的最佳條件為:細胞初始密度2.5×105個/mL，培養(yǎng)基pH值7.4，攪拌速度70r/min，該條件下細胞達到的最大生長密度為1.57×106個/mL。
　　其次，研究了硒酸軟骨多糖對K562細胞的增殖抑制及凋亡誘導作用。通過MTT法檢測發(fā)現(xiàn)硒酸軟骨多糖能顯著抑制K562細胞的增殖，100μg/mL的軟骨多糖作用K562細胞48h后，抑制率可達到80％，且這種抑制作用呈現(xiàn)出明顯的濃度依賴性和時間依賴性。通

3、過細胞形態(tài)顯微鏡觀察、HE染色和Hoechst33342/PI雙染發(fā)現(xiàn)硒酸軟骨多糖能夠使K562細胞出現(xiàn)體積縮小、染色質(zhì)固縮等典型的凋亡特征。通過流式細胞術發(fā)現(xiàn):(a)硒酸軟骨多糖能夠將k562細胞阻滯在S期，多糖處理48h后S期細胞數(shù)由40.75％增至62.93％;(b)羅丹明-123染色顯示強熒光部分的細胞數(shù)量降低了18％，細胞線粒體膜電位顯著下降。通過免疫熒光和ELISA法檢測發(fā)現(xiàn)，硒酸軟骨多糖處理后，細胞周期相關的CyclinA