1、目的:腎間質(zhì)纖維化是幾乎所有慢性腎臟疾病發(fā)展至終末期腎臟病的共同通路。腎間質(zhì)纖維化是以腎小管基底膜的增厚、腎間質(zhì)成分增多及基質(zhì)沉積為主要表現(xiàn)，其病理發(fā)展過程涉及炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、多種細(xì)胞因子及多種信號通路、細(xì)胞凋亡、成纖維細(xì)胞增殖和活化及上皮細(xì)胞向成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化等多因素作用。血紅素加氧酶(heme oxygenase，HO)是血紅素分解代謝過程中的起始酶和限速酶，以往的研究發(fā)現(xiàn)，HO有三種同工酶，分別為HO-1、HO-2、HO-3，

2、其中HO-1極易被誘導(dǎo)表達發(fā)揮多種生物學(xué)作用。HO-1存在于哺乳動物（包括人）的多種組織細(xì)胞的微粒體中，正常情況下，在某些特定器官或組織微量表達或不表達，以脾臟表達最高。在腎臟組織主要表達于皮質(zhì)腎單位的近端、遠端小管、髓質(zhì)的集合管上皮細(xì)胞。過去已有大量研究表明，HO-1及血紅素分解代謝的膽綠素、CO、Fe2+均能起到抗炎、抗氧化應(yīng)激、抗細(xì)胞凋亡、調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖等保護作用，而腎間質(zhì)纖維化亦涉及炎癥、氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡等多因素作用。這說明HO

3、-1可能通過其生物學(xué)功能發(fā)揮抗腎間質(zhì)纖維化作用。國外研究表明，HO-1缺乏的動物模型中，腎小管上皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化(epithelialmyofibroblast transdifferentiation，EMT)的程度明顯增加，腎間質(zhì)纖維化明顯加重。而EMT時產(chǎn)生的肌成纖維細(xì)胞能夠表達α平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)。國內(nèi)研究表明，在單側(cè)輸尿管梗阻模型中，通過誘導(dǎo)HO-1表達，能夠下調(diào)單核細(xì)胞

4、趨化蛋白-1(monocytechemotactic protein1，MCP-1)及轉(zhuǎn)化生長因子β1(transforming growthfactor, TGF-β1)的水平，延緩腎間質(zhì)纖維化的進展。因此，誘導(dǎo)HO-1的高表達可能成為延緩腎間質(zhì)纖維化的一種方法。他汀類藥物具有降脂、降壓、抗增殖、穩(wěn)定斑塊等作用，已成為臨床上常用的心腦血管疾病治療藥物。研究表明，他汀類藥物能夠誘導(dǎo)HO-1高表達減輕腎臟缺血再灌注損傷。他汀類藥物在UUO

5、中能否誘導(dǎo)HO-1而影響TGF-β1、α-SMA水平，減輕腎間質(zhì)纖維化，目前尚未有報道。本實驗擬通過建立單側(cè)輸尿管梗阻(unilateral urethral obstruction，UUO)大鼠腎間質(zhì)纖維化模型，應(yīng)用瑞舒伐他汀藥物干預(yù)，結(jié)合HE染色、Masson染色、免疫組織化學(xué)染色等手段，觀察各個實驗組HO-1、TGF-β1、α-SMA在不同時段的表達，探討他汀類藥物抗腎間質(zhì)纖維化作用的新靶點，為臨床上應(yīng)用他汀類藥物治療腎間質(zhì)纖維化

6、提供新的理論依據(jù)。
　　方法:選擇清潔級健康雄性SD大鼠54只，體重(180±20)克，經(jīng)適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機分成三組如下:1.假手術(shù)組（A組），2.單側(cè)輸尿管結(jié)扎組(B組），3.瑞舒伐他汀治療組（C組），每組各18只。手術(shù)前12小時，大鼠開始禁食水。手術(shù)過程:A、B、C三組均麻醉、消毒后，行左側(cè)腹部縱行切口，逐層游離組織后，暴露左腎，找到左側(cè)輸尿管，A組僅游離左側(cè)輸尿管作為對照，B、C組游離左側(cè)輸尿管后于輸尿管中上1/3交界處

7、結(jié)扎輸尿管并剪斷輸尿管，防止逆行感染。各組大鼠于手術(shù)前一天開始給藥，C組給予瑞舒伐他汀混懸液10mg/(Kg.d)劑量灌胃，A、B兩組均以等容的0.9％氯化鈉注射液灌胃。每天根據(jù)體重情況調(diào)整藥物用量。實驗期間大鼠可自由進食水。術(shù)后第3天、7天、14天，分別從A、B、C三組隨機選取各6只大鼠，手術(shù)取出左側(cè)梗阻腎組織，置入4％多聚甲醛液固定，石蠟包埋，切片。采用HE染色、Masson染色，光鏡下觀察各組大鼠腎組織病理變化，免疫組織化學(xué)方法測

8、定HO-1、TGF-β1、α-SMA在腎組織的表達水平，應(yīng)用多功能真彩色細(xì)胞圖象分析管理系統(tǒng)進行半定量分析。實驗數(shù)據(jù)采用SPSS20.0統(tǒng)計分析軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理，使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±S）表示統(tǒng)計數(shù)據(jù)結(jié)果，單因素方差分析數(shù)據(jù)進行分析，結(jié)果為P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:光鏡下各組HE染色:A組:未見明顯異常;B組:術(shù)后第3天腎小管間質(zhì)見少量炎癥細(xì)胞浸潤，部分腎小管輕度擴張;術(shù)后第7天可見腎小管明顯擴張，上皮細(xì)胞變性、壞死

9、，腎間質(zhì)炎性細(xì)胞浸潤較前增加，腎間質(zhì)寬度明顯增加;術(shù)后第14天，可見較多腎小管萎縮，腎小管基底膜有彌漫性增厚、皺縮。 C組:術(shù)后腎間質(zhì)及腎小管的表現(xiàn)與同時期的B組表現(xiàn)相同，隨梗阻時間延長病變逐漸加重，病變程度略輕于B組，但重于A組。Masson染色:A組:各時期均無明顯膠原纖維沉積。B、C組于術(shù)后第3天，出現(xiàn)腎小管輕度擴張，腎間質(zhì)膠原纖維輕度增加;術(shù)后第7天及第14天，腎小管擴張度較前增加，膠原纖維明顯增多，間質(zhì)纖維化程度較前增加;且隨

10、梗阻時間延長纖維化程度進行性加重，同一時相相比，C組間質(zhì)纖維化病變程度輕于B組，但明顯重子A組。免疫組化染色結(jié)果顯示:(1) HO-1表達:A組:腎小球、腎小管幾乎無表達;B組:腎小管上皮細(xì)胞表達增加，術(shù)后3天至表達高峰，之后隨梗阻時間延長，表達量漸下降，與同時相A組相比仍高于A組，有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);C組:腎小管上皮細(xì)胞表達增加，與B組表達趨勢相同，3天時表達最高，隨梗阻時間延長，表達量進行性下降，但比同時相B組表達量高，與

11、B組同時相相比有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），與A組同時相相比表達量高，有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。(2) TGF-β1表達:A組:在腎小管上皮細(xì)胞有少量表達;B組:腎小管上皮細(xì)胞可見表達，且隨著梗阻時間延長，表達呈進行性增加，與A組同時相相比有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);C組:腎小管上皮細(xì)胞表達與B組表達趨勢相同，但與同時相B組表達相比較均有顯著下降，有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，與A組同時相相比明顯升高，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）

12、。(3)α-SMA表達:A組:腎小管上皮細(xì)胞及腎間質(zhì)幾乎無表達;B組:腎小管上皮細(xì)胞可見表達，腎間質(zhì)少量表達，且隨梗阻時間延長呈進行性增加，與同時相A組相比有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）;C組:腎小管上皮細(xì)胞及間質(zhì)少量表達，與B組表達趨勢相同，但比同時相B組表達量低，有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，且比同時相A組表達量高，有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1在單側(cè)輸尿管梗阻大鼠模型中，TGF-β1、α-SMA水平隨